天然脑活素促细胞增殖和抗细胞衰老作用的研究..docVIP

天然脑活素促细胞增殖和抗细胞衰老作用的研究 ：李映红吴正治吴伟康李明张晓丽陈茵杨敏 摘 要】 目的：探讨天然脑活素对人胚肺二倍体成纤维细胞增 殖能力和复制性衰老的影响及其机理。方法：光镜下观察 MRC-5细胞衰老表型，常规计数细胞代龄、传代速度，MTT法 检测细胞增殖活度，X-Gal染色法观察细胞衰老情况，计数 衰老细胞百分率。结果：天然脑活素可维持细胞的非衰老表 型，增加MRC-5细胞代龄，天然脑活素孵育MRC-5细胞的细 胞增殖能力较空白老龄对照组明显升高，细胞的增殖速度显 著加快。另外，天然脑活素连续培养的细胞在老龄阶段衰老 细胞数显著低于老龄对照细胞。结论：天然脑活素可升高 MRC-5细胞增殖能力，有效延缓细胞的复制性衰老。 关键词】天然脑活素；人胚肺成纤维细胞；增殖活 度；复制性衰老；延缓 〔 Abstract ) 0 bjective To explor e the effects of N atural Cerebrolysi n on cell prolifer ation activity and replicative senesc yonic lung diploid 5 cells) and its mence of human embr fibroblasts (MRC~ replicative senesc yonic lung diploid 5 cells) and its m ence of human embr fibroblasts (MRC~ echanism. Methods To observe the changes of senescent To observe the cha nges of senescent phenotype by light microscope, count the pas sageages a nd velocity, detec t the ) potential of cell proliferatio n by MTT. The chan ges of cells senes cenceof Natural Ce rebrolysin-effecte d MRC-5 cells were studied by X-Gal staining method, a nd the positivecel 1 rates of senesce nee cells were det ected and analyzed . . Results Natur al Cerebrolysin ma intainedunaltered cell morphology an d increased life s pan of MRC-5 by at least 18~21 passa ges. Comparing wit hthe control seniu m cells, the proli feration potential of MRC-5 cells in cubated with Natur al Cerebrolysinwas increased obvious ly (P 〔 Key Words ) N atural Cerebrolysi n； Human embryonic lung diploid fibr oblasts； Prolifera tion activity； Del ay； Replicative s enescence 衰老是细胞的重要生命现象之一，绝大多数正常细胞被 认为仅有有限的分裂能力，当其经过一定的倍增之后，将进 入终末增殖状态，称为细胞衰老。一般来讲，人类胚胎的成 纤维细胞在迗到衰老时，能够复制50代左右，由于这种衰 老是由分裂传代而达到的，故又称之为复制性衰老［1］。探 讨细胞衰老的分子机理是人类认识自我研究的重要组成部 分，从分子水平研究衰老过程中基因及调控变化，已成为目 前衰老机理研究的主要方向，同时研究开发延缓衰老的药物 将为提高人类生存质量提供重要保证，也为衰老相关疾病的 防治提供理论基础和实验依据。 天然脑活素为结合临床经验和现代药效学正交实验优 化筛选而成，本研究在以往基础上以人胚肺二倍体成纤维细 胞为研究对象，观察了天然脑活素对MR C-5细胞表型、细胞 代龄、传代速度、细胞生长增殖能力及衰老相关指标的影响， 旨在探讨其延缓MRC-5细胞复制性衰老的作用及其机理。 1材料与方法 材料 细胞株与动物MRC-5细胞是人胚肺成纤维细胞，由美国 ATCC细胞库提供，并规定28代及以下为年轻细胞，50代及 以上为老年细胞，采用含10 %胎牛血清的EMEM培养液培养。 新西兰家兔，雄性，体重kg，购自广东