小米粒大小转移至1mLTrizol试剂23.PPT

35 35 吉林大学基础医学院 分子生物学教研室 RNA extraction 实验内容 1、小鼠肝脏组织总RNA的提取 注意事项 RNA酶：a. 广泛存在——灰尘、人体唾液、实验器材表面。 b. 生物活性非常稳定——耐热、耐酸、耐碱。 1、 抑制外源性RNase 污染 A. 操作环境空气洁净（带手套、口罩） B. 用新开封的化学试剂（试剂应该专用） C. 一次性塑料器材最好是新开封， (DEPC水处理后）高压灭菌。 D. 玻璃器材、水都应该经过去RNase 处理。 对玻璃器材还应该进行高温烘烤。 2、 抑制内源性RNase 活性： RNase 抑制剂。 RNA分离关键因素：避免RNA酶的污染。 1、mRNA: 1-5% 5`鸟嘌呤7位甲基化—CH3修饰。 1）免受核酸酶破坏， 2）起始、促进蛋白质合成。 3`poly(A)尾巴结构 20-200个A，翻译所必需。 2、tRNA: 10-15% 3