医药-egfr基因突变检测试剂盒说明书.pdfVIP

人类EGFR 基因突变检测试剂盒（荧光PCR 法）说明书 【产品名称】 通 用 名：人类EGFR 基因突变检测试剂盒 （荧光PCR 法） 英 文 名：Diagnostic kit for Mutations of Human EGFR Gene (Fluorescence PCR Analysis) 【包装规格】 20 测试/盒 【预期用途】 表皮生长因子受体（EGFR ）属于I 型酪氨酸激酶受体，定位于细胞膜上。EGFR 被表皮生长因子（EGF ） 等配体激活后，将信号传导至胞内，调控细胞的生长、增殖、转化等生理过程。 EGFR 位于染色体7p11.2，由原癌基因C-erbB-1 编码，包含28 个外显子，其中外显子 18～24 编码受 体酪氨酸激酶功能区。研究表明该区域内发生基因突变与吉非替尼等靶向药物的反应性相关。这类药物的 作用机制主要是通过抑制EGFR 胞内磷酸化而阻滞传导，抑制肿瘤细胞的增殖，实现靶向治疗。EGFR 基因 突变主要是19 外显子的缺失突变和21 外显子的L858R 点突变，占突变总数的90% 以上。19 外显子的缺失 突变集中于746-753 位密码子，其中2 种E746_A750del （2235_2249del15 和2236_2250del15 ）最常见。19， 21 外显子的这些突变造成EGFR 胞内酪氨酸激酶功能区的结构改变，提高EGFR 与靶向药物的结合能力， 使靶向药物疗效更好。据中国2010 版《肿瘤学临床实践指南》数据，亚洲人非小细胞癌EGFR 突变率高达 30~40%，回顾性研究报道显示，使用厄洛替尼或吉非替尼后肿瘤缓解的非小细胞肺癌患者大约90%携带突 变，而未缓解者则无突变。 本试剂盒以人非小细胞肺癌、结直肠癌肿瘤组织切片提取的基因组DNA 为检测样本，用于EGFR 基因 19、21 外显子多种突变的定性检测，因此本试剂盒检测结果仅用于辅助临床医生对非小细胞肺癌、结直肠 癌肿瘤患者制定用药方案。 【检验原理】 本试剂盒基于实时荧光PCR 平台，结合等位基因特异性扩增 （ARMS ）技术、野生型基因扩增抑制技 术和多重PCR 技术检测EGFR 基因 19、21 外显子的14 种突变 （表1）。ARMS 技术是指PCR 引物的3’端 末位碱基必须与其模板DNA 互补才能有效扩增，通过设计特异性ARMS 引物组（共6 条ARMS 上游引物， 包括5 条检测19 外显子突变和1 条检测21 外显子突变的引物）和2 条下游引物，对存在突变的EGFR 基 因19、21 外显子的靶序列进行多重PCR 扩增，并利用分别标记有HEX 荧光基团——BHQ1 淬灭基团和FAM 荧光基团——BHQ1 淬灭基团的两条Taqman 探针分别实现对 19，21 突变外显子扩增产物进行检测。因为 采用了野生型基因扩增抑制剂，使ARMS 体系能够耐受更高浓度的背景野生型EGFR 基因，降低了试剂盒 对基因组样本的DNA 浓度要求，提高了检测灵敏度。 为质控扩增体系的有效性，试剂盒设置了内质控和外质控，内质控基因是人类基因组的一个保守片段， 长度与EGFR 目标片段相似，均为100bp 左右，内控探针采用标记ROX 荧光基团——BHQ2 淬灭基团的 Taqman 探针对内控基因扩增产物进行检测。内控引物、探针及内控基因对ARMS 体系的扩增效率无影响。 阳性对照品是一种扩增效率最低的EGFR 基因19 外显子L747_P753S 突变质粒与野生型人类基因组DNA 的混合物，用于PCR 扩增的外质控。 表1 本产品检测EGFR 基因突变 外显子 突变名称 碱基变化 外显子 突变名称 碱基变化 19 E746_A750del 2235_2249del15 19 L747_E749del 2239_2247del9 19 E746_A750del 2236_2250del15 19 L747_T751del 2239_2253del15 19 E746_T751del 2236_2253del18 19 L747_S752del 2239_2256del18 19 E746_T751A 2237_2251del15 19 L747_T751S 2240_2251del12 19