实验8酪氨酸酶动力学.pptVIP

实验九 酪氨酸酶的动力学 【目的和要求】 【实验原理】 【实验方法】 【思考题】 * 1. 学会测定酶反应速度的基本方法。 2.掌握测定米氏常数Km值的原理和方法。 酪氨酸酶催化的反应为： ?475nm 常用单位时间内、产物的浓度增加量表示。 一、酶活力测定— 酶反应初速度的测定: Time Product Concentration v= dC /dt A =εC d ?: 3600 M-1cm-1 d: 1cm 确定酶反应时间！ 二、 底物浓度[S]对酶反应速度： 一级反应 混合级反应 零级反应 Effect of substrate concentration on the initial velocity of an enzyme-catalyzed reaction. ? Vmax Km Km值测定: 双倒数作图法 （一）酶反应初速度的测定：---酶反应时间的确定 在比色杯中，按下表依次加入试剂： 加入酶液后立即混匀，并每隔15秒读取475nm处的吸光值。 0.03 酪氨酸酶（mL） 1.97 磷酸缓冲液（mL） 1 L-多巴（mL） 注：酪氨酸酶 5U/?l 绘制产物浓度C-Time 反应曲线，观察酶反应初速度，确定酶反应时间。一般在30~120秒左右。 255 120 240 105 225 90 210 75 195 60 180