DNA多态性分型技术2013年.pptVIP

RFLP与PCR-RFLP的应用 结核分枝杆菌IS6110-RFLP分析 厌氧菌16SrRNA基因PCR-RFLP分析 其他 二、随机扩增多态性DNA分析技术 random Amplified Polymorphism DNA， RAPD 以PCR技术为背景，以人工合成的碱基顺序随机排列的寡核苷酸单链为引物，对所研究的基因组DNA进行PCR扩增，经电泳分离后产生DNA指纹图谱。 模板DNA经92～94℃变性解链后，在较低温度下退火，此时，有许多位点能与随机合成的短引物互补而形成双链结构。如果某两位点间在可扩增范围之内，且分别位于互补的两条单链上，并且与引物的3’端相对应，就可以通过PCR得到一个扩增产物。 基 本 原 理 RAPD所用的一系列DNA引物序列各不相同，但对于任意特定引物，它同基因组DNA序列有其特定结合位点，如果基因组在这些区域发生片段插入、缺失或碱基突变就可能导致这些特定结合位点分布发生相应变化，而使PCR产物增加、减少或发生分子量改变，产生多态性图谱。 基 本 原 理 总DNA提取 随机引物合成 PCR扩增 随机引物筛选 电泳检测 图谱分析 ①采用随机引物，无需预先知道被研究生物基因组核苷酸序列； ②引物短，在整个基因组内的结合位点多，2种甚至多种引物可混用； ③成本较低； ④操作简便，快速； ⑤DNA分析效率较高； ⑥所需DNA样品少。 优 点