稀有绚鲫I］I一肌动蛋白启动子的克隆及其驱动活性的初步检测.PDF

第 31卷 第 2期 渔 业 科 学 进 展 Vo1．31，No．2 2 O 1 O 年 4月 PROGRESSIN FISHERY SCIENCES Apr．，2010 稀有绚鲫 I]I一肌动蛋 白启动子的克隆及其 驱动活性的初步检测 叶斐菲 刘 红 蔡生力 王豪杰 李媛媛 (上海海洋大学 农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室，201306) 摘 要 稀有鱼句鲫是一种新型的模式实验鱼 ，具有利用转基 因技术培育开发成为观赏性鱼类的潜 在可能。本实验采用 PCR方法，从稀有鳓鲫基因组 DNA 中分离得到大小为 1584bp的B肌动蛋 白 (t3一actin)基因片段 。序列分析表明，该片段包括长为 1507bp的启动调控 区和 77bp的部分转录区序 列。启动调控 区包括一段长为 109bpt?-actin基 因上游调控序列，不翻译 的外显子 1和 内含子 1。上 游调控序列中含有TATAbox，CAATbox和CArGbox等与转录活性密切相关的作用元件 ，并且在 稀有鱼句鲫fi_actin基因第一个 内含子 中也含有 1个 cArG调控元件 。将该启动子片段克隆到绿色荧 光表达载体 (pAcGFP1—1)上，显微注射入稀有妁 鲫的受精卵中，通过荧光显微镜能观察到绿色荧光 蛋 白的表达。本实验成功分离了具有驱动活性的稀有鳓鲫J3一actin基因启动子。 关键词 稀有的鲫 J3一肌动蛋 白 启动子 序列分析 转基 因 绿色荧光蛋 白 中图分类号 Q344；Q959．46 文献识别码 A 文章编号 1000—7075(2010)02—0080—08 Cloningof~-actinpromoterofGobiocyprisrarus and detectionofitstranscription activity YEFei—fei LIU Hong CAISheng—li WANGHao-jie LIYuan—yuan (KeyLaboratoryofAquaticGeneticResourcesandAqua—culturalEcosystem CertifiedbytheMinistryof Agriculture，ShanghaiOceanUniversity，201306) ABSTRACT Asanew laboratoryfishinChina，Gobiocyprisrarushasthepotentialtodevel— opintoanornamentalfishbyuseofthetransgenictechniques．A DNA fragmentof1，584bpof t3-actingenefrom G．rarusgenomewasobtainedbyPCR，whichincludeda1，507bpofaregula— toryregionanda77bpofpartialopenreadingframe (ORF)．Theregulatoryregion includeda 109bpof5proximalpromoter，anuntranslatedexon，andanintronof~t-actingene．Theproxi— realpromoterregioncontainedconsensussequencesofTATA box．CCAAT boxandCArG box whichwerecriticalfortranscriptionactivity．Moreover，theintronalsocontainedatypicalCArG box．Thispromoterregion fragmentwasinserted into green fluorescentprotein genevector (pAcGFP1—1)，an