疟疾病原学诊断技术.pptVIP

血涂片制作及疟原虫镜检技术 烟台市疾控中心 检验科 授课内容 1.厚、薄血膜血片制作方法。 2.疟原虫的生活史及其各发育阶段的基本特点。 3.间日疟、恶性疟各期疟原虫的形态与镜检技术 血膜的制作 用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘，称厚血膜。无特殊要求的可厚薄血膜分载玻片涂制。 薄血膜的制作 薄血膜 ：取一小滴血（约1～1.5微升的血量），将血滴置于载玻片中部，将推玻片的边缘紧贴载玻片血滴前，使血液沿推玻片边缘散开约 2cm宽时，使推玻片与平置的载玻片形成25～350夹角，平稳、均匀由右向左推片，形成舌型、头体尾分明的薄血膜（约2.0-2.5cm宽 2.5-3.0cm长）。 影响因素：速度快慢、血滴大小、推片与载玻片夹角大小等影响血膜的厚薄、大小。 要求：制成的薄血膜外观：厚薄均匀，无划痕，无起伏，边缘整齐光滑舌状血膜；在镜下看RBC平铺互相接触而不重叠。 薄血膜位置：薄血膜位于载玻片左1/2处。 厚血片制作 厚血膜 ： 用推玻片的一角，从取血部位刮取约4微升左右血量，使血滴与平置的载玻片接触，接着用推玻片角由里向外一个方向旋转2~4圈，涂成直径0.8~1cm大小、圆形厚血膜。 厚血膜要求：外观：圆形厚薄均匀，无划痕。镜下观察其厚度，以每油镜视野5-10个WBC为宜。过厚易于脱落，过薄达不到检出率要求。 厚血膜位置：位于玻片右半部分左1/2处 血膜编号 血膜制成后，立即在玻片面上写上受检者的个人编号，以防差错；待薄血膜干后玻片头可粘贴患者信息，亦可用铅笔在薄血膜头写上血片种类的代号，依次顺序插入标本盒内。 制片时机掌握（取血时间） 采血时间： 现症病人和流调普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。 疟疾典型的临床表现：分前驱期、发冷（寒战）期、发热期、出汗期和间歇期五期。 采血时间： P.v —— 发作后10小时内采血，各期（R、T、S、G）疟原虫均可查见。 P.f —— 发作时采血可查到 R；发作后10天左右采血可查见 G。 间日疟（取血时间） 在前驱期（相当于肝内期疟原虫发育）因原虫密度太低，镜检多为阴性。 发热期：外周血中以环状体（小滋养体）为主，也可见到裂殖体； 发冷寒战期（相当于红内期，成熟裂殖体涨破红细胞期），镜检多为裂殖体和环状体。 出汗期：因原虫密度太低，镜检多为阴性。 发作后数小时，间歇期：外周血中以大滋养体为主，形态较易辩认，为诊断的有利时机。发作36-48h，可检出裂殖体。 发作1-2次后，配子体出现较多。 恶性疟（取血时间） 恶性疟：较理想的取血时间是在发作后至20h内。 初发患者退热后常查不到原虫。 末梢血中检出恶性疟配子体，是在末梢血出现环状体之后的10天左右。 制作血膜的注意事项 1. 玻片清洗时，避免玻片碰撞、磨损。制作血膜的载玻片必须完全清洁而毫无油渍或污垢。制片时，手指只能持载片的边缘，不能接触玻片表面，以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推片的玻片边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。 制作血膜的注意事项 2. 刚涂制的血膜要平放在标本盒内，厚血膜未干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧，造成血膜厚薄不均，厚处不一溶血和着色而影响检查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜，干后应及时装入标本盒并盖严，新的木制标本盒需敞开放置一段时间，让木醇挥发后才能使用，以免厚血膜红蛋白被其固定，不能溶血或染色效果不佳。 制作血膜的注意事项 3. 血膜让其自然干燥，切忌用太阳晒或火烤，干透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天标本尽可能24~48小时内固定染色；冬天也不能超过72小时。放置时间越久，厚血膜越不易脱血，染色效果也差。若不能及时染色，膜血膜宜先用甲醇固定（1~3分钟）然后用过滤清水对厚血膜溶血，晾干固定后装入盒内盖严，待以后染色。 厚薄血膜的优缺点及适用范围 薄血膜：用血量少1-1.5ul，疟原虫的形态完整，便于疟原虫虫种的鉴定。为保证检测的敏感性，常耗时较多，不适用于大规模调查，常出现漏诊。 厚血膜：用血量较多4-5ul，疟原虫胞浆和核有一定程度的固缩，较难识别；但须查范围小，节省时间，阳性检出率较高。 血片的镜检原则 1. 镜检疟原虫，必须对正常厚薄血膜中各种血细胞的形态、结构和染色性质能够识别。 2. 镜检疟原虫，首先要会看薄血膜，在基本上掌握薄血膜中疟原虫形态后，才镜检厚血膜。 3.镜检疟原虫一般只查厚血膜，薄血膜仅作为原虫分类时参考和血片编号之用。 4.镜检疟原虫必须用油镜头配合5X低倍目镜镜检，当发现疑难问题时可调换10X目镜