siRNA联合沉默MMP9和FAK基因对小鼠黑色素瘤高转移细胞.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１４，３４（９）：４０４７ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ ｓｉＲＮＡ联合沉默ＭＭＰ９和ＦＡＫ基因对小鼠黑色 素瘤高转移细胞Ｂ１６Ｆ１０体外侵袭和迁移的影响 １ １ １ ２ ２ １，２ 汤禾静 　唐照勇 　刘隆兴 　张小梅 　王婷 　方廖琼 （１西南大学生物技术学院　重庆　４００７１６） （２重庆医科大学生物医学工程学院省部共建超声医学工程国家重点实验室 超声医学工程重庆市市级重点实验室　重庆　４０００１６） 摘要　目的：观察双基因联合干扰ＭＭＰ９和ＦＡＫ对小鼠黑色素瘤高转移细胞 Ｂ１６Ｆ１０体外侵 袭、迁移能力的影响。方法：分别构建ｐＧＶ１０２ＭＭＰ９ｓｉＲＮＡ，ｐＧＶ１０２ＦＡＫｓｉＲＮＡ重组质粒载体， ＴＭ 脂质体 ２０００介导转染小鼠黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞，实验分为空白对照组、ＡｎｔｉＭＭＰ９组，Ａｎｔｉ ＦＡＫ组、ＡｎｔｉＭＭＰ９＆ＦＡＫ组、阴性对照组。经Ｇ４１８筛选ＧＦＰ＋克隆，流式细胞仪分析阳性率， 激光共聚焦观察转染后细胞形态，半定量ＲＴＰＣＲ检测各组Ｂ１６Ｆ１０细胞ＭＭＰ９和 ＦＡＫ基因的 ｍＲＮＡ转录水平，Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ侵袭、迁移实验测定各组Ｂ１６Ｆ１０细胞体外侵袭、迁移能力。结果：经 Ｇ４１８筛选，３个转染组阳性率分别为９２．４１±１．６４％，９５．７２±０．２１％，９１．５２±０．１１％，且转染后细 胞形态良好；与空白对照组相比，３个转染组的ＭＭＰ９，ＦＡＫｍＲＮＡ转录水平下降明显（Ｐ＜ ０．０１），迁移、侵袭能力明显降低（Ｐ＜０．０１），但ＡｎｔｉＭＭＰ９＆ＦＡＫ组细胞侵袭迁移能力显著低于 ＡｎｔｉＭＭＰ９组和ＡｎｔｉＦＡＫ组（Ｐ＜０．０１）。结论：相比单独沉默ＭＭＰ９或ＦＡＫ，联合沉默ＭＭＰ９ 和ＦＡＫ可明显降低小鼠黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞体外迁移、侵袭能力。 关键词　ＭＭＰ９　ＦＡＫ　ＲＮＡ干扰　黑色素瘤 中图分类号　Ｑ３４３ 　　恶性黑色素瘤（ｍａｌｉｇｎａｎｔｍｅｌａｎｏｍａ，ＭＭ）是一种起 激酶（ＦＡＫ）是一种多功能的非受体酪氨酸激酶，与肿 源于黑色素细胞，发病早期转移率高、致死性强的恶性 ［５］ 瘤细胞的迁移和侵袭密切相关 。有研究显示，ＭＭＰ ［１］ 肿瘤 ，其单一性放疗、化疗敏感性差，尚缺乏有效的 ９和ＦＡＫ在黑色素瘤迁移和侵袭关联的信号通路中是 治疗方法。ＲＮＡ干扰（ＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ，ＲＮＡｉ）是一种 关键因子。 由同源双链ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）在转录水平特异性降解特定 　　分别构建针对ＭＭＰ９，ＦＡＫ基因的重组质粒载体， 基因ｍＲＮＡ的现象，具其较强的特异性、针对性和有效 ＴＭ 通过脂质体 ２０００介导转染小鼠黑色素瘤 Ｂ１６Ｆ１０细 性，能够靶向地沉默肿瘤侵袭、转移过程中的关键性基 胞，靶向沉默黑色素瘤侵袭转移过程中两个关键因子 因，从而抑制肿瘤的发生、发展，在现代肿瘤基因治疗 ＭＭＰ９和ＦＡＫ，观察联合双基因干扰对小鼠黑色素瘤 方面有着无可比拟的优势。 高转移细胞 Ｂ１６Ｆ１０体外侵袭、迁移力的影响，从而探 　　基质金属蛋白酶９（ＭＭＰ９）又称为胶原酶Ｂ，能够 讨黑色素瘤双基因干扰在体治疗的可行性。 降解血管基底膜的主要成分 型胶原，从而参与调解 Ⅳ 肿瘤细胞的迁移和侵袭，还能通过促进血管内皮生长 １　材料与