常见的海洋微生物次级代谢产物的分离纯化.pptVIP

海洋微生物次级代谢产物分离纯化的一般流程与应用举例 姚元江 黄思洋 李艳君 臧兴禹 背景 海洋是个大宝库。 微生物主要来源于深海，环境特殊，有着自己独特的代谢方式，从而产生结构新颖、活性显著的代谢产物。 这些产物可作为新药药源。 要得到这些珍贵药物,必须对海洋微生物的次级代谢产物进行分离和纯化！ 发酵液的预处理与固液分离 加热，调pH，絮凝 沉淀、萃取、超滤 色谱分离 结晶 浓缩、去热原、干燥 分离与纯化的一般工艺过程 与已知一般微生物次级代谢产物分离纯化的主要区别 样品来源：生物样品及供培养的海水分别采自深海。 在发酵之前要对微生物的活性进行摸索性的筛选。（分为四步） 一、微生物分离筛选 称取一定量的生物样品,在无菌状态下加入到适量的灭菌海水中, 振荡混匀，再分别稀释10，100倍共制成3个浓度梯度的样品；各取0．2 mL涂布于固体培养基，每个梯度涂布3个平板。将海水样品取1 mL同上操作，28°C 培养，每天观察并挑出单个生成菌落进行再纯化后接种于固体斜面培养基。 1 100 10 发酵培养及样品制备 微生物分离筛选 活性筛选 静置培养 目标产物的分离纯化 氯仿萃取脱脂去除杂蛋白。 超滤浓缩。 发酵液的预处理与固液分离 加热，调pH，絮凝 沉淀、萃取、超滤 色谱分离 结晶 浓缩、去热原、干燥 分离与纯化的一般工艺过程 氯仿萃取脱脂去除杂蛋白。 超滤浓缩。 目标产物的分离纯化 将次级代谢产物进行离子交换柱层析分离后，盐洗脱峰为活性峰。 收集活性峰脱盐浓缩后上样于凝胶过滤层析柱，收集活性峰透析浓缩后作为纯化样品使用。 氯仿萃取脱脂去除杂蛋白。 超滤浓缩。 整个纯化过程中阳离子交换柱层析纯化效果最为明显,去除了大部分杂蛋白，最终代谢产物纯度提高。 目标产物的活力测定将纯化后的样品配置成溶液,用SDS电泳测定代谢产物的纯度。 举例说明： 芽胞杆菌次级代谢产物的分离纯化的操作流程为例。 用高效液相对其纯度进行分析 总结 基于分析化学、材料化学等学科的发展和微生物代谢产物物质结构的研究,目前用于海洋微生物次级代谢产物的分离纯化方法已经有很多,溶剂萃取法、离子交换分离法、吸附分析法、沉淀分离法、化学萃取法、超临界流体萃取法等在实验中的运用已比较常见。而由于海洋微生物代谢产物的结构特点和理化性质，溶剂萃取、离子交换柱层析、凝胶过滤、吸附树脂吸附等方法比较常用。 文献引用 1海洋微生物次级代谢产物中醌类化合物的研究进展 2海洋微生物次生代谢产物的结构特征和生物活性的研究进展 3海绵来源真菌Aspergillus sp BH4次级代谢产物的初步研究 4海洋微生物低温碱性脂肪酶的纯化与性质研究 5海滨土壤芽胞杆菌次级代谢产物发酵优化、分离纯化及其性质的研究 谢谢大家