拈抗细菌对烟草黑胫病防治效果研究.docVIP

拈抗细菌对烟草黑胫病的防治效果研究-农学论文 拈抗细菌对烟草黑胫病的防治效果研究 李 祝１，万 科１，丛 铭１，张传萍１，施渺筱２ （１．贵州大学生命科学学院真菌资源研究所，贵阳 ５５００２５；２．贵州省安顺学院农学院，贵州 安顺 ５６１０００） 摘要：采用温室盆栽试验测试５株芽孢杆菌属生防细菌对烟草黑胫病的拮抗作用。结果表明，拮抗细菌芽孢杆菌１２０５对苗期烟草黑胫病有较稳定的防治效果，其分泌物还有促进烟株生长的作用，经鉴定１２０５菌株为蜡样芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）。 关键词 ：拮抗细菌；烟草黑胫病；盆栽试验 中图分类号：Ｓ４３５．７２ 文献标识码：A 文章编号：0439－８114（２０15）05－1094-03 DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.05.016 收稿日期：２０１４－０６－１６ 基金项目：贵州省科学技术厅、安顺市人民政府、安顺学院联合科技基金项目（黔科合Ｊ字ＬＫＡ［２０１２］０６号）；毕节市烟草公司项目 作者简介：李 祝（１９７８－），女，贵州毕节人，教授，博士，主要从事农业微生物学研究，（电话）１３５９５１５５０８１（电子信箱）ｚｈｕｌｉｌｕｃｋ＠１６３．ｃｏｍ。 烟草黑胫病［Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ ｖａｒ. ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ（Ｂｒｅｄａ ｄｅ Ｈｅａｎ）Ｔｕｋｅｒ］俗称烂腰病、黑根病，是一种常见的土传真菌病害。烟草黑胫病在苗床及大田中均可发生，尤其是在高温高湿、多雨年份及低洼地区，该病发展蔓延快，在１～２周内可造成整块烟田毁灭，导致绝收［１，２］。随着生物技术的发展和相关研究的深入，生物防治成为烟草黑胫病的研究重点，特别是在利用有益微生物进行病害防治等方面［３－７］。本研究对筛选出来的５株生防细菌进行盆栽防效试验，以研究其对烟草黑胫病的拮抗作用。 １ 材料与方法 １．１ 材料 烟草黑胫病菌病原菌烟草疫霉（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ Ｇｚｕｆｐ－９）由贵州大学生命科学院真菌资源研究室提供。拮抗细菌为芽孢杆菌１１０７、７４０３、１２０５、１６０１、５８０１菌株。烟草品种为毕纳１号。 １．２ 盆栽试验方法 １．２．１ 烟草育苗 采用漂浮育苗法，育苗前将浮盘和盛水方盘进行消毒，检查盘孔是否堵塞，用松散基质填满孔穴，用手指轻微下压至有实落感，约下压１ ｃｍ，然后装满刮平露出盘面孔格，每孔播种毕纳1号种子２~３粒，播种后不再盖基质，立即放入盛有适量水的方盘内。待出苗具备２片真叶时即可进行间苗，确保每孔内有1株均匀一致的烟苗。在烟苗已具有４叶１心，苗高３～４ ｃｍ时剪叶，剪去超过盘孔的根系控制大苗生长，促使小苗生长。后期剪叶两次，促进茎部的生长，达到炼苗的目的［８］。移栽，每盆１株，１０ ｄ后进行处理。 １．２．２ 烟草疫霉孢子悬浮液的制备 利用已分离出的烟草疫霉菌菌株Ｇｚｕｆｐ－９，参照烟草疫霉孢子悬浮液制备方法［９］制备烟草疫霉孢子悬浮液，孢子浓度为１０４个／ｍＬ。 １．２．３ 拮抗细菌接种物的制备 在ＮＡ平板上将分离得到的拮抗菌株１１０７、７４０３、１２０５、１６０１和５８０１活化，取两环活化的培养物分别接入盛有１００ ｍＬ ＮＡ培养液的２５０ ｍＬ三角瓶中，２８ ℃、１６０ ｒ／ｍｉｎ培养３ ｄ，得到拮抗菌株悬浮液。 １．２．４ 接种方法 病原菌接种采用王丽珍［１０］的方法，将烟草疫霉孢子悬浮液灌根接种于烟株根部土壤中。拮抗细菌采用灌根接种法，将已经制备好的浓度为１×１０８个／ｍＬ拮抗菌发酵液灌根，接种于烟株根部土壤中。选择长势大小相近，苗龄４０ ｄ的烟苗，移栽到盆内，每盆１株，移栽１０ ｄ后接种，试验设６个处理，每个处理１５株，设３次重复。①处理组１：在烟株移栽１０ ｄ后，首先接种拮抗菌发酵液１０ ｍＬ，１０ ｄ后再接种烟草黒胫病病原菌游动孢子悬浮液（１０４个／ｍＬ）１０ ｍＬ；②处理组２：在烟株移栽１０ ｄ后同时接种烟草黒胫病病原菌游动孢子悬浮液（１０４个／ｍＬ）１０ ｍＬ和拮抗菌发酵液１０ ｍＬ；③处理组３：在烟株移栽１０ ｄ后，首先接种烟草黒胫病病原菌游动孢子悬浮液（１０４个／ｍＬ）１０ ｍＬ，１０ ｄ后再接种拮抗菌发酵液１０ ｍＬ；④发病对照组：在烟株移栽１０ ｄ后只接种烟草黒胫病病原菌游动孢子悬浮液（１０４个／ｍＬ）２０ ｍＬ，不接种拮抗菌；⑤拮抗菌对照组：在烟株移栽１０ ｄ后接种拮抗菌发酵液２０ ｍＬ，不接种病原菌；⑥空白对照组：在烟株移栽１０ ｄ后接种清水２０ ｍＬ。 １．３ 小区试验 在贵州省毕节市黔西县进行田间试验，所有试验小区的栽培条件均匀