利用重组真核表达载体pCMV—p53转染wt基因及对大鼠C6胶质瘤.PDF

第38卷第1期 浙江大学学报(医学版) Vol38No1 OF 2009丘 JOURNALZHEJIANGUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) 2009 http：∥WWW．journals．zju．edu．on／reed 利用重组真核表达载体pCMV—p53转染wtp53 应 基因及对大鼠C6胶质瘤细胞的热增敏效 石 键1，傅伟明1，张 宏1，赵洪洋2，朱贤立2 (1．浙江大学医学院附属第二医院神经外科，浙江杭州310009； 2．华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科，湖北武汉430022) [摘 要] 目的：探讨C6细胞在加热后的生物学行为改变及转染外源性野生型p53基因(wtp53) 对C6胶质瘤热疗的影响。方珐：提取与鉴定真核表达载体pCMV—p53，利用红色荧光蛋白确定转染 质粒和脂质体的最佳比例。wtp53真核表达质粒稳定转染至大鼠C6胶质瘤细胞系，通过neo基因 胞加热组、反复加热后生长的热耐受C6细胞组和对照组，观察各组细胞的生物学行为及裸鼠接种 interstitial 成瘤率。对裸鼠皮下各组异种胶质瘤做激光间质热疗(1aser 较抑瘤效果。结果：wtp53基因片断经正确鉴定和提取，转染质粒和脂质体的最佳转染比例为1： 6。neo基因稳定表达于转染了阳性质粒的C6细胞中。热耐受C6细胞的生长未受影响，C6／p53 (+)细胞组生长速度减慢，加热组在加热12h后细胞增殖明显受影响，而C6／p53(+)细胞加热组 的细胞增殖活性从6 热组中都可以观察到细胞凋亡形态学改变，流式细胞技术证实C6／p53(+)细胞加热组凋亡率增加 可通过真核载体基因转染技术实现在C6细胞中稳定表达，并能在体内、外抑制大鼠C6胶质瘤细胞 的生长，wtp53表达上调可增加C6细胞对加热的敏感性。 [关键词]神经胶质瘤／病理学；基因，p53；高温，诱发；脑肿瘤；遗传载体；转染；重组，遗传 256 1008—9292(2009)01—0067—08 [中图分类号]Q [文献标识码]A [文章编号] Effectofwt transfectionon of inC6 p53gene sensitivityhyperthermia cells glioma SHIJianlFU ZHANGZHAO ZHU of Wei—ruin91 Hon91 Hong—yan92Xian—li2(1．Department Second of Neurosurgery，TheAffiliatedHospital，CollegeMedicine，Zh巧iangUniversity， of Medical Hangzhou310009，China；2．DepartmentNeurosurgery，UnionHospital，Tongji of Scienceand 430022，China) CollegeHuazhong TechnologyUniversity，Wuhan 收稿日期：2008—05一13修回日期：2008—11—10 基金项目：国家自然科学基金；浙江省医药卫生科学研究基金(2007A091)． 作者简介：石键(1974一)，男，主治医师，博士，研究方向：微侵袭神经外科；E-mail：shishi74@163．corn． 通讯作者：傅伟明(1959一)，男，主任医师；E—mail：fwml95921@h