蛋白表达分离与纯化.pptVIP

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2018-11-09 发布于福建
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蛋白表达分离与纯化.ppt

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蛋白表达分离与纯化

能否用BL21(DE3)表达pGLO？能否用Top10表达pET32a？ OD600=0.6-0.8，加入诱导剂； OD600=1.2-1.4，收获菌体；诱导剂用量 IPTG: 0.2mM; 0.5mM; 1mM 诱导温度 20℃；25/28 ℃；37 ℃ 如何留样能在一张SDS胶图中(10-12 wells)体现诱导的效果、(NH4)2SO4粗分离效果、疏水层析纯化效果、离子交换层析纯化效果、凝胶过滤层析纯化效果？ Day 0: 准备实验材料 Day 1: GFP表达质粒的提取；Top 10感受态细胞的制备；GFP表达质粒转化Top 10。 Day 2: GFP表达菌株扩大培养；GFP的诱导表达。 Day 3: 表达菌株的收集、破碎；硫酸铵沉淀所用浓度的确定；硫酸铵沉淀GFP；疏水层析。 Day 4: 离子交换层析；透析；凝胶过滤层析。 Day 5: SDS；染色；脱色，观察结果。记得带照相机！课堂提问——每人2-3个问题；权重：20% 总结报告——PPT，5人一组，10分钟；权重：20% 实验报告——权重：60% 要求：标准的论文格式：中、英文标题和摘要；前言；材料与方法；结果；讨论；参考文献。 PPT：照片、视频展示个性，潮！鸣谢： A 1 2 3 C3H12-GFP GFP (control) 4 5 6 拟南芥原生质体洋葱表皮原核：E.coli 真核：Yeast Insect mammals Vector: pET series, pGEX series, gateway series, pMAL, pTWIN I, pETDuet, pBAD, et. al. BL21(DE3), BL21(DE3, pLysS), Origami, Rosetta, Rosetta-gami Top10, HB101, C41/C43