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LightCycler480荧光定量PCR技术原理 罗氏诊断产品 （上海）有限公司 应用专员 胡旭霞 Xu_xia.hu@ Roche Applied 1 Science 主要内容  普通PCR与荧光定量PCR区别  荧光定量PCR的检测模式  荧光定量PCR技术平台的功能开发 Roche Applied 2 Science 1 PCR－Theoretical Approach 1 cycle = 2 Amplicon n N=N ×2 2 cycle = 4 Amplicon 0 N: 扩增分子数 3 cycle = 8 Amplicon N : 起始分子数 4 cycle = 16 Amplicon 0 n: 扩增循环数 5 cycle = 32 Amplicon 6 cycle = 64 Amplicon 7 cycle = 128 Amplicon Roche Applied 3 Science 实 时 荧 光定量PCR技术 通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对 PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过 程，结合相应的软件可以对结果进行分析，计 算待测样品的初始模板量。 Roche Applied 4 Science 2 两者区别 普通 PCR 荧光定量 PCR 在PCR反应的平台期检测， 在PCR反应的对数期检测， 分析终点产物的量 分析起始点产物的量 检测模式为电泳 实时监测荧光信号 0 10 动力学范围有限 动力学范围广(10 ～10 拷贝/mL ) 副产物形成不能鉴别 有效鉴别非特异扩增和突变 绝对和相对定量困难(相对于 不仅可以相对定量， 看家基因的定量复杂) 还可以绝对定量 Roche Applied 5 Science Cp(Cross