液态活检技术以及其临床应用学习课件.ppt

“液态活检”的标记物 CTCs ctDNA(cfDNA) 主要指来自于抗凝的外周血全血， 完整的肿瘤细胞 主要指来自于抗凝血外周血的血浆，片段化的DNA片段 一般认为来源于肿瘤原发灶/转移灶 肿瘤瘤细胞凋亡/坏死释放的DNA片段 活细胞，一般不宜长期保存 提取纯化后的核酸，可以保存 可以用于细胞学形态、结构分析；也可以分析细胞DNA、RNA、蛋白质等各类标志物 一般用于DNA突变监测、甲基化等DNA修饰相关分析 用于病情评价、预后判断，肿瘤早期诊断潜力不明确 用于个体化治疗，肿瘤早期诊断潜力相对明确 还有miRNAs，Peptides， Exosomes（外泌体），Secretomes（分泌物质组）等。 * ctDNA（circulating tumor DNA），即循环肿瘤DNA，从字面意思来讲，指的是由肿瘤细胞释放到血液循环系统中的DNA。但是在了解ctDNA之前，我们要知道另一个与之相关的概念——cfDNA。 cfDNA（cell-free DNA），或者叫血浆游离DNA，是血浆中游离存在的DNA，它们有的来自于正常细胞，有的来自于异常细胞（如肿瘤细胞），还有部分来自于我们外部（如病毒DNA）。 来源： 1、来自于坏死的肿瘤细胞 2、来自于凋亡的肿瘤细胞 3、来自于肿瘤细胞分泌的外排物 什么是ctDNA ? * 人们逐渐明白，cfDNA中 携带肿瘤特有突变的那一小部分DNA，确确实实是由肿瘤细胞释放出来的，ctDNA的研究终于与肿瘤关联起来。 ctDNA的发现 * 在几乎所有种类的癌症中，都检测到了ctDNA所带有的标志性突变，并且肿瘤越晚期，病情越严重，肿瘤的恶性程度越高， ctDNA特有突变的频率就越高。一项针对15种癌症进行的ctDNA测序研究显示，分别有47%，55%，69%，82%的I-IV期癌症病人中能检测到高于一定频率的ctDNA突变；而另一项使用更高灵敏度测序技术的研究则表示，对于II期以上的病人，均能100%检测到突变。 不同分期癌症的ctDNA检出情况 不同癌症种类的ctDNA检出情况 * CtDNA临床应用领域 CtDNA作为一种新的肿瘤标志物，将在肿瘤的诊断、治疗及预后检测等方面发挥重要的作用，尤其是对于一些不具有典型临床症状、检查无特异性和诊断困难的肿瘤可避免复杂的、具有创伤性的活检。ctDNA来自肿瘤细胞的体细胞突变，不同于遗传突变的是，遗传突变存在于体内每个细胞。因此，ctDNA是一种特征性的肿瘤生物标记物，并且还可以被定性、定量和追踪。 * 检测9名接受特罗凯一线治疗的NSCLC患者血浆中ctDNA的EGFR突变情况，一直到患者进展至PD。 在接受治疗后，所有患者血浆中的含有EGFR突变的ctDNA浓度出现下降，其中8人的EGFR突变完全消失。 有6名患者的血浆中重新检测到EGFR突变的时间要比进展至PD的时间早4个月以上！随着治疗，所有9名患者的血浆中均检出一定量T790M突变。 血浆中没有检测到EGFR的3名患者，进展至PD期时，其肿瘤仅在胸腔内有缓慢进展。 利用NSCLC癌患者血浆中的ctDNA检测EGFR突变 -- Clin Cancer Res, 2014, march * -- Nature Medicine, 2014, May * * * ctDNA中PI3KCA的检测可用于预测 原发性乳腺癌患者的预后 1. ctDNA有PI3KCA检出的乳腺癌患者，其预后要比没有检出的患者差。 -- Breast Cancer Res Treat， 2015， March 2. ctDNA中PI3KCA拷贝数高的乳腺癌患者，其预后要比拷贝数低的患者差。 * 循环肿瘤细胞指从实体瘤中脱离出来并进入外周血液循环的肿瘤细胞。 CTC形成、播散及转移的模式图 原发肿瘤血管生成侵润 侵入血管内 侵入血管外(CTC) 血管内增殖(CTM) 转移 转移 播散肿瘤细胞（DTC）微转移休眠灶 循环肿瘤细胞（CTC） 循环肿瘤微栓 （CTM） 凋亡的CTC 侵润 肿瘤细胞扩增 血管生成 上皮－间质转化 （EMT） 间质－上皮转化 （MET） 转移到骨髓和其他器官 * * CTC的稀有性和异质性 Cancers, 2013；Nature Review of Clinical Oncology, 2010 CTC的临床应用方向 CTC检测 6、指导 用药 3、术后 监控 1、预后 评估 2、疗效监测 5、早期筛查 4、辅助诊断 * 用两种不同的方法检测CTC以评估非小细胞肺癌患者的预后 1. ISET法检出率为 104/210(50%)，CellSearch法检出率为82/210(39%)，两种方法检出CTC的患者的DFS均明显劣于