琼脂扩散法测定乳链菌肽效价的优化.PDFVIP

※生物工程 食品科学 2007, Vol. 28, No. 03 175 张国只，陈林海 * ，杨天佑，陈洪卫，王利敏，段宇珩，秦广雍 (郑州大学离子束生物工程省重点实验室，河南 郑州 450052) ：对影响琼脂扩散法测定乳链菌肽效价的四个主要因素：琼脂浓度、Tween20 、培养温度、预培养进行 了研究。结果表明，0.75% 琼脂的效价检测培养基、0.5% Tween20 的添加以及30℃培养条件，可提高乳链菌肽 效价测定的灵敏度和精确性；4℃预培养有利于乳链菌肽在琼脂中的扩散。 ：乳链菌肽；琼脂扩散；预培养 Optimization of Agar Diffusion Bioassay for Nisin ZHANG Guo-zhi，CHEN Lin-hai*，YANG Tian-you，CHEN Hong-wei，WANG Li-min， DUAN Yu-heng，QIN Guang-yong (Ion Beam Bioengineering Provincial Key Lab, Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China) Abstract ：The four major factors agar, Tween20, culture temperature and pre-diffusion, affecting the agar diffusion bioassay for nisin were studied. The results showed that when agar concentration is 0.75%, the addition of Tween20 0.5%, and the culture temperature 30℃, the accuracy and sensitivity of agar bioassay for nisin can be improved. And the pre-diffusion at 4℃ can enhance the diffusion of nisin in agar. Key words：nisin；agar diffusion bioassay；pre-diffusion 中图分类号：Q331 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2007)03-0175-04 乳链菌肽(nisin)亦称为乳酸链球菌素，是由乳酸乳 究的基础上，本文对影响nisin 在琼脂平板上扩散的主 球菌(lactococcus lactis)产生的一种34个氨基酸的多肽抗 要因素，如琼脂浓度、培养温度、Tween20、4℃预 菌物质，目前作为天然食品防腐剂已经在欧盟(EU)、美 培养等进行系统研究，旨在对琼脂扩散法测定nisin 效 国、中国、巴西等五十多个国家和地区广泛应用。测 价的条件进行优化。 定nisin 效价的方法主要有琼脂扩散法[1]、浊度检测法 [2]、ATP 生物荧光法[3]、酶联免疫吸附法[4]、流式细胞 1 材料与方法 术法[ 5 ] 等方法。琼脂扩散法因具有简单、方便、经济 1.1 材料 的特点，是目前较为常用的检测方法。根据扩散形式 1.1.1 指示菌 的不同，琼脂扩散法可分为直线扩散法、点滴法、滤 藤黄微球菌Micrococcus luteus AS1.2156。 纸片法、管碟法和打孔法，打孔法