PI-3K2fGSK3β信号通路介导心肌营养素-1对心肌细胞缺氧复氧损伤的作用.pdf

摘要 摘要 目的：通过研究体外培养的心肌细胞，利用心肌细胞急性缺氧复氧模型模拟心 胞成活率，心肌细胞凋亡，心肌肌酸激酶，线粒体模电位(a1l，m)等的影响，探讨 cT一1在心肌细胞缺氧复氧损伤中所起的作用及机制，通过CT一1信号通路 PI-3K／GSK3B阻断剂LY294002干预，从分子水平阐明PI一3K／GSK3B介导心肌营 养素一1对心肌细胞缺氧复氧损伤中的保护作用。 方法： 1．乳鼠心肌细胞培养：取出生1-3天的SD大鼠心肌组织，按改良的Simpson等 方法进行分次水浴搅拌消化，差速贴壁法纯化心肌细胞，以1×106／om2的细 胞密度接种于35mm培养皿。 2．缺氧复氧模型的建立：心肌细胞生长接近会合状态，呈现同步搏动时开始实 验。模拟缺血溶液配制缺氧液，以95％N：一5％C0：预饱和1h，将培养的细胞经缺 氧液缺氧3h，之后换成复氧液培养3h。 3．实验分组：(分5组) (1)对照组：更换培养基后CO：孵箱中正常培养；(2)缺氧复氧组：缺氧3h， 复氧3h处理； 氧3h处理；(4)缺氧复氧+CT-l+LY294002组(P13K／GSK3B阻断剂)：缺氧3h， 后加