米托蒽醌对大鼠胃癌基因表达的影响.DOCVIP

米托蒽醌对大鼠胃癌基因表达的影响 杨宏梅 邢影 郑美珍 辽宁省肿瘤医院内科 （110042） [摘要]：目的 研究米托蒽醌对胃癌的治疗，病变胃粘膜PCNA、p53和Caspase-3等基因表达的影响。方法 MNNG 诱发的大鼠胃癌模型，通过米托蒽醌处理胃癌大鼠模型；免疫组化法检测胃癌组织中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)的表达和分光光度计法检测组织中的Caspase-3活性，通过Real-time PCR和western Blot检测细胞凋亡相关蛋白p53的表达。结果 米托蒽醌治疗组的PCNA阳性率、Caspase-3活性和p53表达量与对照组均有显著差异。米托蒽醌用药后，PCNA和p53基因表达下降，Caspase-3活性上升。结论 米托蒽醌可能通过改变基因的表达对的治疗大鼠胃癌有较好作用，进而对抑制或逆转癌症的发展起到有一定的作用。 [关键词]：米托蒽醌；PCNA；Caspase-3；p53；胃癌； Affection of Mitoxantrone on the expression of genes in rats with gastric carcinoma [Abstract]：Aim?To study the curative effects and the mechanism of Mitoxantrone with gastric cancer, and to investigate the expression of PCNA, Caspase-3 and p53 in gastric mucosa. Methods The proliferating cell nuclear antigen （PCNA）protein was detected by Immunohistochemistry, the activity of Caspase-3 was detected by spectrophotometer method, and the expression of p53 was detected with Real-time PCR and western Blot. Result the expressions of PCNA and p53 were higher than common in the treatment gastric mucosa, and the activity of Caspase-3 was lower than these in the normal rat. Conclusion the Mitoxantrone is effective in the treatment of rats with gastric cancer by changing the expression of some protein [Keyword]：Mitoxantrone；PCNA；Caspase-3；p53；gastric cancer 米托蒽醌是一种广谱的抗肿瘤类药物，其抗肿瘤活性明显高于环磷酰胺、氟尿嘧啶、甲氨喋呤、长春新碱和阿糖胞苷，相当或略高于阿霉素，而且抗瘤谱广范。目前其作用机制尚不清楚，可能抑制DNA及RNA合成。本研究用N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导大鼠腺胃粘膜上皮细胞异倍体而形成的动物胃癌模型，采用米托蒽醌治疗模型大鼠，通过免疫组化，RT-PCR和Western Blot等技术，检测胃粘膜组织中的癌基因表达情况，探讨米托蒽醌对胃癌治疗的作用。 1 材料与方法 1.1实验试剂 N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍（MNNG），FluKa公司，米托蒽醌（Mitoxantrone）杭州民生药厂，Caspase-3活性检测试剂盒，购自碧云天生物技术研究所，总RNA提取试剂盒、TIANScript cDNA第一链合成试剂盒2×Taq Real MasterMix（SYBR Green）均购自天根生物科技（北京）有限公司，引物合成由北京三博远志公司完成，p53和PCNA单克隆抗体购于Abcam公司。 1. 2 胃癌大鼠造模 采用MNNG给药饲饮法，选用SPF级SD雄性健康大鼠，体重100-120g，适应性喂养1周，随机抽取进行分组，实验分为正常空白组(N组)，供给普通饲料及自由饮水；胃癌模型组(M组)，每日自由饮用100mg/L的MNNG和10％NaCl混合液(避光)，同时予40％酒精2ml/只灌胃，连续24周，24周后自然恢复同正常组大鼠常规饮食；米托蒽醌小剂量干预组(ML组)，取24周后成模大鼠每日每只按5mg/kg灌胃；大剂量干预组(MH组)，成模大鼠每日每