硫化物醌氧化还原酶定向表达载体的构建及细胞转染-江苏农业学报.PDFVIP

江苏农业学报(JiangsuJ.of Agr.Sci. ),2015,31(1):100 ~105 100 http:/ / 于建宁,杨燕燕,于峰祥,等. 硫化物醌氧化还原酶定向表达载体的构建及细胞转染表达检测[J].江苏农业学报,2015,31 (1):100鄄105. doi:10.3969/ j.issn.1000鄄4440.2015.01.015 硫化物醌氧化还原酶定向表达载体的构建及细胞转染 表达检测 1 2 3 4 1 1 于建宁 ,摇 杨燕燕 ,摇 于峰祥 ,摇 时小艳 ,摇 徐小波 ,摇 王公金 (1.江苏省农业科学院畜牧研究所/ 动物品种改良和繁育重点实验室,江苏 南京 210014;2.青岛市植物园管理处,山东 青岛 266071; 3.南京农业大学动物科技学院,江苏 南京 210095; 4.江苏食品职业技术学院医药与健康管理系,江苏 淮安 223003) 摇 摇 摘要:摇 为建立硫化物醌氧化还原酶(SQR)的肠道定向表达载体,同时通过转染小鼠肠道上皮细胞确定载体 的有效性,本试验采用重叠PCR、中间载体法、酶切连接法获得重组载体,通过脂质体转染法将重组载体转入小鼠 肠道上皮细胞,并鉴定重组载体的特异性表达。 结果显示,成功构建了以肠脂肪酸结合蛋白质(IFABP)为启动子 的SQR肠道定向表达载体pcDNA3.1(鄄)鄄IFABP鄄SQR鄄GFP,并在小鼠肠道上皮细胞中检测到表达的融合绿色荧光 蛋白质(GFP)。 表明IFABP启动子能够在肠道细胞中定向启动SQR 的表达。 关键词:摇 硫化物醌氧化还原酶; 定向表达载体; 肠脂肪酸结合蛋白质; 肠上皮细胞 中图分类号:摇 S634.3摇 摇 摇 文献标识码:摇 A摇 摇 摇 文章编号:摇 1000鄄4440(2015)01鄄0100鄄06 Constructionof directionedexpressionvectorfor sulfide鄄quinone reductase gene and its expression 1 2 3 4 1 1 YUJian鄄ning ,摇 YANG Yan鄄yan ,摇 YU Feng鄄xiang ,摇 SHI Xiao鄄yan ,摇 XU Xiao鄄bo ,摇 WANG Gong鄄jin (1.Institute of Animal Science,JiangsuAcademy of Agricultural Sciences/ Laboratory of Animal Improvement and Reproduction,Nanjing 210014,China; 2.QingdaoBotanical GardensManagement Office,Qingdao266071,China; 3.Collegeof AnimalScienceand Technology,NanjingAgricultural Universi鄄 ty,Nanjing 210095,China;4.Department of Medical and Health Management,Jiangsu Food Science College,Huai忆an223003,China) 摇 摇 Abstract:摇 The directed expression vector pcDNA3. 1(鄄)鄄IFABP鄄SQR鄄GFP for sulfide鄄quinone reductase(SQR) genewere successfully constructedbymeansof nestedPCR,intermediatevectorandrestrictionenzymeligation. Thevector was transfectedintomous