紫外可见分光光度法原理与应用-.pptVIP

紫外-可见分光光度法的原理及应用　 紫外-可见分光光度法的原理 物质对光的选择吸收 当一束光照射到某种物质的固态物或溶液上时，一部分光会被吸收或被反射，不同的物质对于照射它们的光束的吸收程度是不同的，对某个波长的光吸收强烈，对另外波长的光吸收很小或不吸收，我们把这种现象称为光的选择吸收。 一切物质都会对可见和不可见光中的某些波长的光进行吸收。 物质呈现各种各样颜色，就是它们对可见光 中某些特定波长的光线选择吸收的结果。 物质的结构决定了物质在吸收光时只能吸收某些特定波长的光。我们可以利用测量物质对某种波长的光的吸收来了解物质的结构特性。 用经过分光后的不同波长的光依次透过该物质，通过测量物质对不同波长的光的吸收程度（吸光度），以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，就可以得到该物质在测量波长范围内的吸收曲线。这种曲线体现了物质对不同波长的光的吸收能力，称为吸收光谱。 紫外-可见分光光度法的原理 入射光 透射光 不同波长光 检测器 吸收光谱 紫外-可见分光光度法的原理-定性分析 不同结构的物质吸收光谱也不同，这是对物质进行定性分析的基础：通过检测吸收光谱来比对鉴定分析物质。 波长范围 吸光度 利用标准物质定性分析  在相同条件下，测定未知物的吸收光谱，与标准物的吸收光谱进行比较，如果两吸收光谱的形状和吸收峰的数目、位置、拐点等完全一致，就可初步判定未知物与标准物是同一种物质。 紫外-可见分光光度法是利用物质对光的吸收光谱，对物质进行定性分析或定量分析的方法。按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光光度法和可见分光光度法，合称为紫外-可见分光光度法。 紫外-可见分光光度法的原理-定量分析 Lambert – Beer 光吸收定律：当一束平行单色光通过均匀的样品时，其吸光度与吸光组分的浓度、吸收池的厚度乘积成正比. 入射光 I0 透射光 It L C 吸收系数 吸光系数 　　1．定义 　　一定条件下，吸光物质在单位浓度及单位液层厚度时的吸光度，叫这个物质的吸光系数。 　　2．两种表示方法 　　(1) 摩尔吸光系数(ε )：一定波长下，吸光物质的溶液浓度为1mol/L，液层厚度为1cm时，溶液的吸光度。 　　(2)百分吸光系数(ελ)：一定波长下，吸光物质的溶液浓度为1g/100ml(1%)，液层厚度为1cm时，溶液的吸光度。 紫外-可见分光光度法的原理-定量分析 波长范围 吸光度 最大吸收波长 利用标准曲线法定量分析 在一定波长（λmax）下测定某物质的标准系列溶液的吸光度作标准曲线，然后测定样品溶液的吸光度值，由标准曲线求得样品溶液的浓度或含量。 0 1.0 2.0 3.0 4.0 c(mg/mL) 。 。 。 。 0.80 0.60 0.40 0.20 0.00 Ax cx ⑴测定步骤 ①首先配制一系列被测物的标准溶液，测其吸光度，绘出A-c工作曲线； ②在相同条件下，测出被测物的吸光度Ax; ③根据Ax的值在工作曲线上查处cx的大小。 ⑵适用范围 大批重复试样的分析。 标准曲线法(工作曲线法) 未知物的吸光度 未知物的浓度 　　根据 Lambert- Beer定律，以该物质吸收光谱图中的λmax为入射光，首先配制一个与被测溶液浓度相近的标准溶液cs，测其As，再将样品溶液推入光路，测其Ax ，则试样溶液的浓度cx为： 　　此法适于非经常性的分析工作，准确度不如标准曲线法。 紫外可见分光光度法的定量方法 单一组分的测定 （1）标准对照法 * 例： 维生素B12的含量测定精密吸取B12注射液2.50mL，加水 稀释至10.00mL；另配制对照液，精密称定对照品25.00mg，加水稀释至1000mL。在361nm处，用1cm吸收池，分别测定吸光度为0.508和0.518，求B12注射液注射液的浓度（单位ug/mL) 1）对照法 2.吸收系数法 C=A/E1%L 当其为百分吸收系数E1%时 吸光度的测量：紫外-可见分光光度计 0.575 光源 单色器 吸收池 检测器 显示 在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：可见光光源，如钨灯和卤钨灯；紫外光源，如氢灯和氘灯。 1 光源 紫外-可见分光光度计的组成 根据测定时所选用的光源： ?可见分光光度法(400?800nm) ?紫外分光光度法(200?400