MV感染病儿实时荧光定量PR检测及意义　.doc

CMV感染病儿实时荧光定量PCR检测及意义 ：刘薇蒋玉红，孙佰秀，李海峰，罗兵 】目的探讨实时荧光定量PCR法检测病儿尿液 中巨细胞病毒（CMV） ?DNA含量在诊断和动态监测CMV感染 中的意义。方法应用PE5700全自动PCR扩增分析仪，检测 35例临床高度怀疑有CMV感染病儿（病儿组）尿液中的 CMV9DNA拷贝数，随机选择45例同年龄段患非感染性疾病病 儿作为对照组，比较两组CMV阳性标本中CMV?DN A含量，并 测定治疗后的病毒载量。同时与血清C MV?IgM抗体检测结 果进行比较。对部分病儿进行临床观察和随访。结果病儿 组C MV感染27例，阳性检出率为％;对照组C MV感染12例， 阳性检出率为％。治疗后两组病儿尿液中CMV2DNA拷贝数下 降幅度均较大，与治疗前比较，差异有显著性（t=、，P R法 CMV阳性检出率高于血清CMV?IgM检测方法。9例病儿随访 2年，1例胆管闭锁病儿手术后CM V病毒载量仍在较高水 平，1年后发展为肝硬化；4例CMV肝炎经治疗后，1例CMV? DNA转阴，3例仍阳性；4例无症状性感染病儿CMV?DNA转 阴或降至低水平。结论实时荧光定量PCR技术检测CM V感 染具有快捷、灵敏度高、特异度高等优点，量化结果便于 对治疗过程进行连续监测，为病儿治疗和随访提供有效帮 助。 关键词】巨细胞病毒感染；荧光免疫测定；聚合酶 链反应 巨细胞病毒（CMV）是己知病原微生物中最易引起小儿急、 慢性感染的病毒之一，早期准确诊断CMV感染具有重要的意 义［1］。CMV感染的临床表现多样，以往多通过检测血清特异 性IgM以及定性P C R检测病毒DNA进行诊断，但易出现假 阴性和假阳性结果。本文采用实时荧光定量PCR法检测可 疑CMV感染病儿尿标本中CMV?DN A含量，以评价其在C MV 感染病儿诊断、治疗及动态监测中的价值。 1资料与方法 一般资料 2017年5月?2017年5月，选择青岛市儿童医院收治 临床高度怀疑有CMV感染病儿（病儿组）3 5例，男20例 女1 5例；年龄2d?1岁。根据CMV感染诊断方案［2 ］，当 病儿出现与CMV感染相关的症状、体征时，诊断为症状性感 染；当病儿无相关症状，无或有受损器官的体征和（或）实验 室检查异常，诊断为无症状性感染。并选取同期45例同年 龄段患非感染性疾病住院病儿作为对照组，其中男23例， 女22例。 检测方法 尿CMV?DN A测定采用实时荧光定量PCR方法。清洁小 儿外阴，留取新鲜尿液2mL送检。试剂由深圳匹基生物有限 公司提供，仪器为美国PE公司PE5700基因扩增仪，扩增结 束后拷贝数小于106/L为阴性，拷贝数大于106/L为阳性， 并由仪器根据标准曲线自动计算出定量结果。 血清C MV?IgM抗体检测采集小儿非抗凝静脉血2mL，分 离血清置4 °C保存，采用美国H 0 PE公司生产ELISA试剂 盒检测血清CMV?IgM抗体。 治疗方法 症状性感染组病儿一经确诊有CMV感染，立即给予更 昔洛韦10mg / (kg ? d)加入50 g/L葡萄糖注射液10 0? 2 OOmL中静脉滴注，连用10d为1个疗程，同时辅以保肝 药物如维生素C、肝复肽等治疗。根据病情和肝功能、C MV 病毒载量的复查结果决定治疗疗程。无症状性感染组病儿 用更昔洛韦抗病毒治疗1个疗程。 随访 症状性感染组和无症状性感染组病儿分别于治疗后半 年、1年和2年监测肝功能和CMV病毒载量，并应用无创性 超声观察小儿的肝脏形态学、血流动力学相关指标改变及 肝脏是否有纤维化。 统计学方法 用统计软件进行数据处理，CMV?D NA拷贝数以指数表 示（log 10） X。计量资料组间比较采用t检验，计数资料 比较用x 2检验。 2结果 实时荧光定量PCR法检测 病儿组C MV阳性者（症状性感染）27例，占％;对照组 CMV阳性者（无症状性感染）12例，占％。与治疗前比较， 两组治疗后CMV ?DNA拷贝数指数下降幅度均较大，差异）。 治疗前、治疗后两组间CMV7DNA拷贝数指数比较，差异均 有显著表1。 两种方法的检测结果比较 实时荧光定量PCR法CMV阳性检出率为％（39/80），血清 CMV?IgM检测方法CMV阳性检出率为％（11/80），前者阳性检 出率高于后者。 随访结果 9例病儿随访2年，1例胆管闭锁病儿手术后CMV病毒载 量仍在较高水平，1年后发展为肝硬化；4例CMV肝炎病儿 治疗后，1例CM V?DNA转阴，3例C M V?DNA仍阳性，其中1 例预后不良，3例预后良好；4例无症状性感染病儿 CMV7DNA转阴或降至低拷贝水平。 表1症状性感染组与无症状性感染组治疗前后C MV?DN A拷贝数指数比较（略） 与治疗前无症状性感染组比较，# C MV属疱