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原核蛋白（包涵体）表达案例 实验目的 以客户提供的目的蛋白基因构建表达载体，通过原核蛋白表达体系获得目的蛋白A。 实验设计 （1）分析客户提供的目的蛋白序列，设计蛋白表达方案； （2）选择钟鼎特色载体pCzn1，构建表达质粒pCzn1-A； （3） IPTG诱导进行目的蛋白表达，并且优化表达条件，将诱导条件调整至37℃，经分析目标蛋白主要呈包涵体形式，通过Western Blot检测蛋白A是否表达； （4）通过Ni柱纯化获得目的蛋白A，SDS检测纯化蛋白纯度，BSA方法测定蛋白浓度。 蛋白分析 （1）经EditSeq翻译目的蛋白A序列：m.w.=23.25kd，pI=5.22 （2）经UniProt匹配，蛋白A物种来源：人类 （3）蛋白性质分析 蛋白亲疏水分析 蛋白跨膜结构域分析 蛋白信号肽预测 分析结果： 目的蛋白整体呈亲水性、无跨膜结构域、无信号肽序列，可尝试全长表达。 结论：将目的基因构建在钟鼎特色载体pCzn1上，利用载体自带信号肽分泌表达。 表达载体构建 pCzn1-A质粒酶切验证： 酶切鉴定Marker: 200,500,80 酶切鉴定 Marker: 200,500,800,1200,2000,3000,4500 Line1: 酶切前质粒 Line2: 酶切后质粒 基因名称：A（OD260/OD280:1.82） 酶切位点：NdeI /XhoI 钟鼎特色载体pCzn1 钟鼎特色载体pCzn1 4.2 pCzn1-A质粒测序验证： 部分序列比对结果图 蛋白表达及纯化 蛋白表达鉴定SDS分析M: 蛋白质分子质量标准 蛋白表达鉴定SDS分析 M: 蛋白质分子质量标准 1: 未诱导 2: 诱导后 3: 诱导破碎后上清 4: 诱导破碎后沉淀 蛋白纯化SDS分析 M: 蛋白质分子质量标准 1: 破碎后处理样品 2: 流出 3: 洗脱 蛋白Western Blot 蛋白Western Blot鉴定分析 M: 蛋白质分子质量标准 1: 纯化后样品 实验结论 目的蛋白A在IPTG诱导下进行包涵体形式表达，蛋白表达成功。