elisa2乙肝两对半5 ppt课件知识讲稿.ppt

ELISA-2 （乙肝两对半的检测）;【器材】;【试剂】;【标本】;准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 配洗涤液：用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释； 加样品：每孔加入待测样品75ul/孔，同时设置阳性对照、阴性对照，空白对照（不加样品），轻轻振荡混匀； 孵育：贴上封膜，37℃反应60min; 加酶结合物：每孔加入50ul/孔（空白对照不加），震荡10秒钟；;孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min; 洗板：洗板机5次，最后一次尽量扣干； 显色：先加显色液A 50ul，再加入显色液B 50ul，贴上封膜，37℃反应30min(避光)； （注：显色从加入第一滴显色液B开始计时） 终止：加终止液50ul； 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度)。;结果判断及解释 COV=2.1×OD阴性对照 阳性：OD样品≥COV 阴性：OD样品＜COV 检测有效性 OD阴性对照≤0.10， OD阳性对照≥1.0 OD空白对照≤0.04（双波长检测） ;准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 配洗涤液：用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释； 加样品：每孔加50ul，同时设阳性对照、阴性对照和空白对照（不加样品）； 加酶结合物：每孔50ul（空白对照不加）； 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min；;洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留时间10-15s，并注满反应微孔； 显色：先加显色液A 50ul，再加入显色液B 50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避光)； （注：显色从加入第一滴显色液B开始计时） 终止：加终止液50ul； 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度);结果判断及解释 COV=2.1 × OD阴性对照（ OD阴性对照低于0.05按0.05计算） 阳性：OD样品≥COV 阴性：OD样品＜COV 检测有效性 OD阴性对照≤0.10，OD阳性对照≥1.0 OD空白对照≤0.015（双波长检测） ;准备：试剂盒各组份在37℃平衡30min； 配洗涤液：用纯化水按1:25将浓缩洗液稀释； 加样品：每孔50ul，同时设阳性对照、阴性对照和空白对照（不加样品）； 加酶结合物：每孔50ul（空白对照不加）； 孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min；;洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留时间10-15s，并注满反应微孔； 显色：先加显色液A50ul，再加入显色液B50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避光)； （注：显色从加入第一滴显色液B开始计时） 终止：加终止液50ul； 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度)。;结果判断及解释 COV=2.1 × OD阴性对照（ OD阴性对照低于0.05按0.05计算） 阳性：OD样品≥COV 阴性：OD样品＜COV 检测有效性 OD阴性对照≤0.10，OD阳性对照≥1.0 OD空白对照≤0.015（双波长检测） ;e抗体检测(竞争抑制法);显色：先加显色液A 50ul，再加入显色液B 50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避光)； （注：显色从加入第一滴显色液B开始计时） 终止：加终止液50ul； 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度);结果判断及解释 COV=0.5 ×（OD阳性对照+OD阴性对照） 阳性：OD样品≥COV 阴性：OD样品＜COV 检测有效性 OD阴性对照≥1.0，OD阳性对照≤0.05 OD空白对照≤0.015（双波长检测） ;c抗体检测(竞争抑制法);孵育：贴上封膜，37 ℃反应30min； 显色：先加显色液A 50ul，再加入显色液B 50ul，贴上封膜，37℃反应15min(避光)； （注：显色从加入第一滴显色液B开始计时） 终止：加终止液50ul； 判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度);结果判断及解释 COV=0.5 ×（OD阳性对照+OD阴性对照） 阳性：OD样品≥COV 阴性：OD样品＜COV 检测有效性 OD阴性对照≥1.0，OD阳性对照≤0.05 OD空白对照≤0.015（双波长检测） ;;7.洗液如??结晶形成建议放置37℃充分溶解，再稀释； 8.洗板：(洗板机) 1)每次使用前、后用蒸馏水或去离子水冲洗，以防止管路堵塞和腐蚀； 2)加液量不能过多溢出，但又能充满整个反应微板(350ul); 3)一般洗板次数不应少于5次； 4)最好采用有底部冲洗和两点冲洗的程序。