桦褐孔菌发酵菌粉成分剖析.docVIP

桦褐孔菌发酵菌粉成分剖析 　　摘要：对桦褐孔菌（??Inonotus obliquus??）发酵菌粉中的各种成分进行了较全面的分析。结果表明发酵菌粉中营养成分较丰富，其中粗蛋白、总氨基酸含量分别为25.73%和15.18%。菌粉中不饱和脂肪酸是优势脂肪酸，以亚油酸和油酸为主，还含有丰富的甾醇、酚类物质和多种矿质元素。用桦褐孔菌发酵菌粉提取粗多糖，得率为28.55%、多糖的分子量主要集中在2~40 kDa，单糖组成为阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖，摩尔比为：??1.3∶1.0??∶20.4∶2.1，多糖产品中含有酸性多糖，糖苷键主要是α型。?? 　　关键词：桦褐孔菌； 发酵菌粉； 化学成分； 活性成分； 分析 　　 　　 　　桦褐孔菌（??Inonotus obliquus??）隶属于非褐菌目（Aphyllophorales）、多孔菌科（Polyporaceae），在中国主要分布于黑龙江省和吉林省，该菌寄生在白桦、银桦、榆树、赤杨等活立木的树皮下或砍伐后树木的枯干上［1］。自16世纪以来，在东欧、俄罗斯、波兰、芬兰，桦褐孔菌一直被作为民间药物使用，它具有降血糖、抗肿瘤、抗病毒与增强免疫等功效［2］。桦褐孔菌菌核在野生环境下很难形成，并且生长极为缓慢，野生资源十分有限，有人尝试人工栽培该菌，但目前未见产业化生产［3］。采用液体发酵培养桦褐孔菌菌丝体可实现规模化工业生产，满足日益增长的市场需求，也是目前最经济、最环保的方法。因此，笔者对液体发酵生产的桦褐孔菌菌粉的营养成分及多糖、三萜、甾醇、总酚等活性成分进行了较为全面的分析，为该菌的开发利用提供参考。?? 　　1 材料与方法 　　1.1??菌种 　　 桦褐孔菌（??I. obliquus??）CFCC6026菌株购自中国林业微生物菌种保藏管理中心。?? 　　1.2?Ψ⒔途?粉的制备 　　 桦褐孔菌菌种于PDA培养基上28 ℃培养14 d，接入装有100 mL发酵培养基（2%葡萄糖， 1%玉米粉，1.5%麸皮汁，0.3%蛋白胨，0.2% ??KH????2??PO????4????，0.1% MgSO????4??，pH 4.0）的摇瓶(??500 mL??)中，接种量10%，150 r/min，25 ℃培养40 h制成液体菌种。将液体菌种接入装有800 L发酵培养基的发酵罐（1500 L）中，接种量??6.25%??，25 ℃，通气率2.0 vvm的条件下培养150 h，将发酵产物（菌丝体与发酵液）混和匀浆后喷雾干燥得桦褐孔菌发酵菌粉［4］。?? 　　1.3?Ψ椒? 　　1.3.1?λ?分、灰分、粗脂肪、粗纤维和还原糖含量的测定 　　 菌粉中水分［5］、灰分［6］、粗脂肪［7］、粗纤维［8］的含量参照文献测定，粗蛋白含量用凯氏定氮法测定［9］（2300型凯氏定氮仪，上海贝特公司）；还原糖含量用3, 5-二硝基水杨酸法测定［10］。?? 　　1.3.2??矿质元素含量的测定 　　 用原子吸收分光光度仪测定菌粉中矿质元素的含量［11］（PE/3030系列原子吸收分光光度计，美国PE公司；SpectrAA 220石墨炉原子吸收分光光度仪，美国Varian公司）。?? 　　1.3.3?Π被?酸组成分析 　　 菌粉用6 mol/L盐酸110 ℃酸解22 h后用氨基酸自动分析仪（835-50G型，Hitachi公司）分析其氨基酸组成。?? 　　1.3.4?χ?肪酸组成分析 　　 菌粉中脂肪酸按文献方法进行提取与甲酯化后用气相色谱仪（GC-14A型，日本岛津公司）分析脂肪酸组成［12］。?? 　　1.3.5??甾醇、总酚和三萜含量 　　 菌粉中甾醇类化合物的含量用HPLC的方法测定［13］，总酚含量用Folin-Ciocalteu法测定［12］，三萜含量用重量法测定［12］。?? 　　1.3.6?Χ嗵呛?量及其分子量分布、单糖组成分析 　　 按文献［14］的方法提取菌粉粗多糖，计算粗多糖得率，并采用苯酚硫酸法测定粗多糖中总糖含量。?? 　　粗多糖样品经Savage法除蛋白、H????2??O????2??脱色处理后用0.1 mol/L硝酸钠配成2 mg/mL的溶液，以分子量为828 Da和4.6、10、70、580、??2000 kDa??的Dextran T系列葡聚糖为参照，采用高效凝胶过滤色谱法（HPGFC）测定(Waters 600高效液相色谱仪，Waters公司)多糖的分子量分布。色谱柱：Ultrahydrogel????TM?? Linear ??300 mm??×7.8 mm×2 μm；流动相：0.1 mol/L硝酸钠；流速：0.9 mL/min；柱温：45 ℃。?? 　　粗多糖乙酰化后用气相色谱分析单糖组成［15］。??