双重PCR快速检测KPC和NDM耐药基因.PDF

医学研究生学报 ２０１８年１１月 第３１卷 第 １１期　 Ｊ Ｍｅｄ Ｐｏｓｔｇｒａ，Ｖｏｌ．３１，Ｎｏ．１１，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ，２０１８ ·１１５３ · 论　 　 著 （基础研究） 双重ＰＣＲ快速检测ＫＰＣ和ＮＤＭ 耐药基因 顾芸芸，孙　 宁，姚新月，史利宁，陈芳芳，李晓军 　 　 ［摘要］　 目的　 检测耐药基因的核酸技术，已成为有效监测和控制耐药菌扩散的强有力工具之一。 建立一种快速检测 ＫＰＣ和ＮＤＭ两种耐药基因的方法，以指导临床用药和监控院内细菌耐药性流行情况。 　 方法　 根据肺炎克雷伯菌碳青霉烯 酶（ＫＰＣ）和新德里金属β⁃内酰胺酶（ＮＤＭ）的基因保守区，设计ＰＣＲ反应的引物，优化扩增体系，建立同时检测耐药基因ＫＰＣ 和ＮＤＭ 的方法，分析方法的灵敏度和特异性，并应用于铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌株的检测。 　 结果　 ＫＰＣ和ＮＤＭ基因 的序列比对结果与原序列相比一致性为１００％。 ＫＰＣ⁃２ 阳性标准品和标准菌株肺炎克雷伯菌ＡＴＣＣ ＢＡＡ⁃１７０５均出现预期大 小一致的目的片段（１５１ｂｐ）；ＮＤＭ⁃２ 阳性标准品与ＮＤＭ 阳性肺炎克雷伯菌出现与预期大小一致的目的片段（２６１ｂｐ），均无非 特异性扩增。 经对ＰＣＲ产物进行测序验证，产物序列与耐药基因ＫＰＣ⁃２和ＮＤＭ⁃１序列一致性为 １００％。 双重ＰＣＲ检测耐药 ２ ２ × × 基因ＫＰＣ和ＮＤＭ 的最低可检测浓度分别为７ １０ 和５ １０ ｃｏｐｉｅｓ／ 反应。 １３株对碳青霉烯耐药的肺炎克雷伯菌株中１２株检 测到耐药基因，检出率为９２．３％，其中ＫＰＣ 阳性 １０株（８３．３％），ＮＤＭ 阳性２株（１６．７％），其余１０株碳青霉烯敏感的肺炎克雷 伯菌株未检测到 ＫＰＣ 和 ＮＤＭ；１３株铜绿假单胞菌中６株对碳青霉烯耐药的菌株中２ 株检测到耐药基因，均为ＫＰＣ，检出率 为３３．３％，其余７株均未检测到ＫＰＣ 和 ＮＤＭ。 　 结论　 双重ＰＣＲ方法能够快速有效地用于ＫＰＣ和ＮＤＭ两种耐药基因的检 测，并具有灵敏度高、特异性强等优点，对于指导临床用药与监控院内细菌碳青霉烯类抗生素耐药性的传播具有重要意义。 　 　 ［关键词］　 双重ＰＣＲ；肺炎克雷伯碳青霉烯酶；新德里金属β内酰胺酶 　 　 ［中图分类号］　 Ｑ３４３．１１　 　 　 ［文献标志码］　 Ａ　 　 　 ［文章编号］　 １００８⁃８１９９（２０１８）１１⁃１１５３⁃０５ 　 　 ［ＤＯＩ］　 １０．１６５７１／ ｊ．ｃｎｋｉ．１００８⁃８１９９．２０１８．１１．００７ Ｄｕｐｌｅｘ ＰＣＲ ｆｏｒ ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｄｒｕｇ⁃ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｇｅｎｅｓＫＰＣ ａｎｄＮＤＭ １ ２ ２ ２ ２ ２ ＧＵ Ｙｕｎ⁃ｙｕｎ ，ＳＵＮ Ｎｉｎｇ ，ＹＡＯ Ｘｉｎ⁃ｙｕｅ ，ＳＨＩ Ｌｉ⁃ｎｉｎｇ ，ＣＨＥＮ Ｆａｎｇ⁃ｆａｎｇ ，ＬＩ Ｘｉａｏ⁃ｊｕｎ （１．Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｊｉａｎｇｓｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ ２１２０１３，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ；２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆ ＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉ⁃ ｃｉｎｅ ｏｆ ＰＬＡ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｎａｎｊｉｎｇ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｒｅｇｉｏｎ，ＰＬＡ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１０００２，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ） 　 　 ［Ａｂｓｔｒａｃｔ ］　 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　 Ｔｈｅ ｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇｄｒｕｇ⁃ｒｅｓｉｓｔａｎｔｇｅｎｅｓｈａｓｂｅｃｏｍｅｏｎｅｏｆｔｈｅｐｏｗｅｒｆｕｌｔｏｏｌｓｆｏｒ ｍｏｎ