《化学染色》课件.pptVIP

血液细胞化学染色 检测方法与应用 山东省立医院 . 张健 细胞化学染色概述 在组织化学的基础上发展起来的一个分支 细胞学与化学相结合形成 保持细胞形态基础上，在细胞原位根据化学反应的原理 研究细胞的化学成分的性质，蛋白质、酶类、脂类、糖类、无机盐、核酸及金属 鉴别各种类型的血液细胞，提高血液病的诊断及鉴别诊断、疗效观察等 骨髓细胞检查常用的染色方法 瑞氏染色（Ｗrights stain） 姬姆萨染色（Giemsa stain) 瑞氏－姬姆萨复合染色 （Wright Geimsa mixture staing） 过氧化物酶染色（POX） 碱性磷酸酶（NAP） 钙-钴法 与 偶氮偶联法 糖原染色(PAS) 又称（过碘酸--雪夫氏反应） 铁染色(普鲁士兰) 氯化醋酸AS-D萘酚酯酶染色（AS-DCE） α- 醋酸萘酚酯酶染色（α- NAE加NaF） 醋酸AS-D萘酚酯酶染色（NAS—DAE） 醋酸AS萘酚酯酶染色 α-丁酸萘酚酯酶染色 α-NBE α- 醋酸萘酚酯酶与氯化醋酸AS-D萘酚酯酶双染色 α- 丁酸萘酚酯酶与氯化醋酸AS-D萘酚酯酶双染色 其他染色方法： SB ACP染色 阿利新蓝染色 胶体铁染色 phi小体染色等等 骨髓细胞检查中的临床应用 一、确定急性白血病的类型： 常用POX、SB PAS、 NAP、 ACP、 酯酶染色（…….） 二、某些血液病的鉴别诊断： 铁染色区别：缺铁性贫血OR非缺铁性贫血； NAP鉴别：CML OR 类白反应、AA OR PNH、PV（真红）OR 继红（SE）； PAS区分：M6 OR MA、Gaucher’s disease OR Nieman-pick’s disease、骨髓转移的腺癌细胞 OR 白血病细胞 ACP区分：多毛细胞与淋巴细胞、T淋巴细胞与B淋巴细胞、Gaucher’s disease OR Nieman-pick’s disease 三、观察疗效、估计预后： AA NAP积分增高，当病情好转OR CR时NAP积分降低甚至正常； CML慢性期NAP显著降低OR为0分，CR过程NAP上升甚至正常； IDA外铁消失、内铁百分率减低，当治疗有效时增加。 慢性疾病所致贫血，患者体内单核-巨噬细胞系统铁释放障碍、红细胞利用铁能力降低，铁储备增加，因此外铁增多、内铁减少。 细胞化学染色的一般步骤 一、固定： 保持细胞的结构和成分，根据不同成分选择适当的固定液，可使蛋白质、酶类、脂类、糖类、无机盐、核酸及金属等成分变成不溶性物质，在染色过程中不脱落。 常用化学固定法，如：甲醛蒸气固定，标本浸入甲醇、乙醇、丙酮、甲醛等固定液，两种及以上混合液，如：10%甲醛甲醇液，甲醛丙酮液等 二、显色： 金属沉淀法、 偶氮偶联法、 联苯胺色素法、 Schiff反应、 普鲁士蓝反应、 脂溶染色法等等 三、复染： 显色后，为了进行对比染色方法，易观察，进行复染 细胞核复染（苏木素、甲基绿、中性红、沙黄、核固红） 细胞浆复染（伊红、刚果红、藻红、光绿、坚固绿） 基本的染色方法—瑞氏染色 瑞氏染色（Ｗrights stain） 染色原理： 瑞氏染料中含有美蓝和伊红二种染料，前者为碱性，后者为酸性，它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力，而使其显现出不同的色调，以便于辩认。 细胞核中的核蛋白中强碱性物质与瑞氏染料中的酸性染料伊红有亲和力，故染成红色；核蛋白中还有少量的弱酸性蛋白及其氨基，它又与瑞氏染料中的美蓝起作用，故细胞核呈紫红色 较幼稚细胞的胞浆和细胞核的核仁含有酸性物质，与瑞氏染料中的碱性染料美蓝有亲和力，故染成蓝色 当酸碱物质各半时，则染成红蓝色或灰红色，即所谓嗜多色性。 试剂配制 瑞氏染料 1.0g 甲　醇 600ml 将瑞氏染料置于清洁的研钵内，加少量的甲醇（也可以加入10ml甘油，充分研磨使染料研成细粉末易溶解）充分研磨染料，加入甲醇溶解，倒入棕色玻璃瓶中，未溶解的染料再加少量甲醇研磨，直到染料溶完，600ml甲醇全部用完为止。 磷酸盐缓冲液（PH6.4~6.8） 磷酸二氢钾（KH2PO4） 0.3g 磷酸氢二钠（Na2HPO4) 0.2g 蒸馏水 加至 1000ml 配好后校正PH值，备用 染色方法 ： (1) 将已编号的涂片平放于染色架上。最好不要在