《副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立与应用》-毕业论文.docVIP

辽宁医学院2010届本科生毕业论文 PAGE PAGE 2 精品 目 录 TOC \o 1-3 \h \z \u HYPERLINK \l _Toc249235541 摘 要 PAGEREF _Toc249235541 \h 1 HYPERLINK \l _Toc249235542 Abstract PAGEREF _Toc249235542 \h 2 HYPERLINK \l _Toc249235543 前 言 PAGEREF _Toc249235543 \h 3 HYPERLINK \l _Toc249235544 1 材料与方法 PAGEREF _Toc249235544 \h 4 HYPERLINK \l _Toc249235545 1.1 菌种、血清及其他试剂 PAGEREF _Toc249235545 \h 4 HYPERLINK \l _Toc249235546 1.2 抗原的制备 PAGEREF _Toc249235546 \h 4 HYPERLINK \l _Toc249235547 1.3 间接ELISA的操作步骤 PAGEREF _Toc249235547 \h 5 HYPERLINK \l _Toc249235548 1.4 间接ELISA反应条件的确定 PAGEREF _Toc249235548 \h 5 HYPERLINK \l _Toc249235549 1.5 间接ELISA的特异性 PAGEREF _Toc249235549 \h 6 HYPERLINK \l _Toc249235550 1.6 间接ELISA的重复性 PAGEREF _Toc249235550 \h 6 HYPERLINK \l _Toc249235551 1.7 间接ELISA的临床应用 PAGEREF _Toc249235551 \h 6 HYPERLINK \l _Toc249235552 2.1 间接ELISA反应条件的筛选 PAGEREF _Toc249235552 \h 6 HYPERLINK \l _Toc249235553 2.2 间接ELISA的特异性 PAGEREF _Toc249235553 \h 7 HYPERLINK \l _Toc249235554 2.3 间接ELISA的重复性 PAGEREF _Toc249235554 \h 7 HYPERLINK \l _Toc249235555 2.4 间接ELISA的临床应用 PAGEREF _Toc249235555 \h 7 HYPERLINK \l _Toc249235556 3 讨论 PAGEREF _Toc249235556 \h 7 HYPERLINK \l _Toc249235557 参考文献 PAGEREF _Toc249235557 \h 8 HYPERLINK \l _Toc249235558 致 谢 PAGEREF _Toc249235558 \h 9 HYPERLINK \l _Toc249235559 附 录 PAGEREF _Toc249235559 \h 10 副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA检测方法的 建立与应用 摘 要 采用超声裂解的副猪嗜血杆菌菌体上清作为包被抗原，建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。通过对试验条件进行筛选优化，确定了最佳反应条件：抗原包被浓度80 ug/mL，37℃ 作用2 h后4℃过夜包被，待检血清的稀释度为1：320，抗原抗体反应时间为1 h，酶标二抗稀释度为l：15 000，作用时间为1 h，底物显色时间为15 min。待检血清S/N值≥2.5时判为阳性，S/N值2.5时判为阴性。特异性、重复性和敏感性试验以及对200份送检血清的检测结果表明，建立的间接ELISA方法的特异性和重复性良好，敏感性比间接血凝试验高，可用于副猪嗜血杆菌的检疫和流行病学调查。 关键词：副猪嗜血杆菌；抗体；间接酶联免疫吸附试验 Establishment and application of an indirect ELISA for detection of antibody against Haemophilus parasuis Abstract An indirect EL1SA coated with supernatant of sonicated Haemophilus parasuis serovar 5cell culture was established.The results of chessboard titration tests showed that coating ant