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第七章 分子发光分析法 本章教学内容： 7.1 概述 7.2 分子荧光分析法 7.3 分子磷光分析法 7.4 化学发光分析法 7.5 实验技术 7.6 应用 1 7.1 概述 2 有些物质受到光照射时，会吸收特定波长的光，即会吸收光谱，除此之外，还会发射出比原来吸收波长更长的光。当激发光停止照射后，这种光若随之很快消失，叫荧光；若激发光停止后仍可持续发光一段时间，叫磷光。荧光和磷光都属于光致发光。 还有电致发光、化学发光、生物发光等。 由于物质分子结构不同，所吸收光的波长及发射的荧光波长也不同。利用物质的荧光谱线位置的不同可以定性鉴别物质；同种物质的浓度不同，所发射的荧光强度不同，利用这个性质可以定量分析。这种分析法叫荧光分析法。 荧光法最主要的优点之一是灵敏度高。紫外吸收法的灵敏度为10-7 g/mL，而荧光法可达10-10~ 10--12 g/mL。 对于有机化合物，荧光法的选择性高于紫外吸收法。 因此，荧光法在生物化学、环境科学、医药学、食品分析、卫生检验、农林牧产品分析和科研领域中具有特殊的重要性。 分类 根据激发光波长范围 根据待测物质的存在形式 X射线荧光分析法 紫外-可见荧光分析法 红外荧光分析法 分子荧光法 原子荧光法 本章主要介绍分子的紫外-可见荧光。 7.2.1 分子光谱的产生-----电子自旋的多重性 多重性（multiplicy, M）：电子自旋的状态 单重态(singlet state, S)：分子中所有电子自旋都相反配对的电子态(M=1) 三重态(triplet state, T)：分子中电子对的电子自旋平行的电子态(M=3) 7.2 分子荧光分析法 5 S0 S1 T1 M=1 M=1 M=3 S----电子的总自旋量子数 对同一物质，物质所处的多重态不同，性质明显不同 S态磁场中不分裂，抗磁性；T态分子磁场中分裂，顺磁性; 2 电子在不同的（单、多重）态间跃迁需换向，不易发生; 3 各状态能量高低： S2T2S1T1S0 4 S0T1跃迁禁阻，但是S1 和T1发生互换后，T1 S0跃迁可产生磷光； Jablonski 能级图 6 1. 振动驰豫 (vibrational level relaxation, VR) Jablonski 能级图 2. 内转换(internal conversion, IC) 7. 外转换(external conversion, EC) 分子的去激发过程 （绿色虚线） 4. 系间窜跃(intersystem crossing, ISC) （黑色虚线） 7 5. 分子荧光 (vibrational level relaxation, VR) Jablonski 能级图 6. 延迟荧光(prompt fluorescence) 7. 分子磷光(delayed fluorescence, DF ) 分子的去激发过程 8 1 荧光激发光谱固定发射波长λem ，扫描激发波长λex而获得的荧光强度If ------激发波长的关系曲线；反应了不同激发波长激发荧光的相对效率； 7.2.2 分子荧光的性质 If～λex 2 荧光发射光谱固定激发波长λem ，扫描发射波长λem而获得的荧光强度If ------发射波长的关系曲线；反应了不同发射波长激发荧光的相对效率； If～λem 本质：吸收光谱 本质：荧光发射光谱 If～λex和If～λem可组成两维光谱，用于选择条件。 9 a) 单色器改变λem，同一荧光物质If～λex曲线形状不变，只是灵敏度有变化，即曲线高低变化；b) 理论上，λex(max)和 λabs (max) 相等，激发光谱和吸收光谱相同； a) 荧光光谱的形状(If～λem曲线)和激发波长λex无关， b) 分子荧光的λem总比其相应的λex长，这种波长的位移表明荧光激发和发射之间的能量损失，称为Stokes位移；c) 荧光光谱和吸收光谱有镜像关系(mirror image) 荧光激发光谱特点： 荧光（发射）光谱特点: 10 7.2.