病毒感染的实验诊断 ppt课件资料讲解.pptVIP

病毒感染的实验诊断?;;?????? ?;?;?;?;?;?; （二）标本的运送和保存 标本采集后注意无菌、冷冻、保湿、立即送检。 分离培养病毒的标本要尽快送到实验室处理和接种。如不能及时送检，可在4℃冷藏数小时，如需较长时间保存则应置-70℃。放置在-20℃，病毒容易灭活，冻存液中需加入甘油或二甲亚砜等作保护，避免反复冻融使病毒灭活。; 为了抑制细菌生长通常在病毒传送培养基（VTM）中加入抗生素如青霉素100U/l和链霉素100μg/ml，为了抑制真菌的生长加入2.5μg/ml二性霉素B或40μg/ml制霉菌素。; ????? ?; 1.组织培养 （1）??概念 将人或动物离体的活组织或分散的活细胞，在实验室的试管或培养基中，模拟体内的生理条件使之生存和生长，称之为组织培养。 （2）??组织培养的类型 A 器官???养：如气管、肠段。器官保存了原功 能，用于分离某些有器官特异性的病毒。 B 组织块培养：如肝组织块培养肝炎病毒。 C 细胞培养（单层细胞培养）：现广泛使用的 组织培养技术。; （3）细胞培养的种类和方法 根据细胞的来源、染色体特性和传代次数的不同可分为三类： 1．? 原代和次代细胞培养 离体的新鲜组织或器官，机械处理 胰蛋白 洗涤 吹打 酶消化 加入营养液 单个细胞悬液 1-3次 细胞计数 、调整细胞浓度 分装在培养 生长 瓶内培养 形成单层细胞，称为原代细胞培养 ; 胰酶消化 转种新的培养瓶 形成单层 细胞，称为次代细胞培养 ?2．? 二倍体细胞株 原代细胞多次连续传代后仍保持二倍体染色体特性（即含23对染色体），称之为二倍体细胞。传代细胞寿命一般为40~50代，大多数为成纤维细胞,如人胚肺细胞。广泛用于病毒分离和疫苗制备。; 3．传代细胞系 来源于肿瘤细胞或细胞株传代过程的变异细胞。细胞增殖特征和染色体均类似于肿瘤细胞。不宜用于疫苗的制备，常用于病毒的分离和鉴定。 （4）组织培养的特点 优点：A．来源广；B．不受机体免疫因素影响，个体差异小，敏感范围广；C．易于观察病变；D．可用于病毒的分离、鉴定、疫苗的制备；E．易管理，相对比较经济。 缺点：条件要求高，必须要有细胞培养的条件。 ; 2. 鸡胚接种 鸡胚是用于分离粘病毒科、疱疹病毒、痘类病毒的较为理想的材料。 ? （1） 常用接种部位和用途 38-39℃ 新鲜受精卵 5-13天 ; 卵壳; ①? 卵黄囊接种：用于流行性脑炎病毒分 离 ② 羊水腔接种：用于流感病毒、副流感 病毒的初次分离 ③ 尿囊腔接种：用于流感病毒、腺病毒、 腮腺炎病毒分离 ④ 绒毛尿囊膜接种：用于痘病毒、疱疹 病毒分离 ; （2）????鸡胚接种的特点 优点：A.鸡胚是一个整体，可有多种 接种途径； B.可收获大量病毒； C.鸡胚本是无菌无病毒的，对 接种病毒不产生抗体； D.来源广，操作简便。 缺点: A.易感病毒较少，应用较局限； B.反复用鸡胚传代，病毒毒力 可下降。 ; 3. 动物接种 ; ; ;（三）病毒的鉴定 1.初步鉴定 根据临床症状、流行