皮肤科细胞培养及临床应用 ppt课件培训讲学.pptVIP

皮肤病学相关研究中所涉及的细胞培养问题;细胞培养中常用的几个术语;细胞株(Cell strain): 由具有某些特性与标志的细胞选择或克隆化而派生的亚系。 细胞周期(Cell cycle) 细胞前一次分裂结束开始至本次分裂结束所经历的时相过程。 4个时期：S期：DNA合成期 M期：有丝分裂期 G1期：有丝分裂完成至DNA合成开始的间隙期 G2期：DNA复制结束至有丝分裂开始的间隙期 G0期：某种原因导致细胞不再沿周期进行，进入 休眠状态;细胞一代时间(Cell generation time) 单个细胞两次连续分裂的时间间隔。 群体倍增时间(Population doubling time) 在对数生长期进行计算的细胞增加一倍所 需要的时间。;克隆(Clone) 单个细胞通过有丝分裂形成的细胞群体，它们的遗传特性相同。 细胞融合(Cell fusion) 体外培养条件下，经化学试剂、病毒或物理方法诱发，使不同体细胞融合成杂交细胞(Hybrid)。 细胞汇合(Confluence) 器皿中培养的细胞彼此汇合形成单层。;原代培养(Primary culture) 从直接取自生物体细胞、组织或器官开始的 培养。 传代培养(Passage)(Subculture) 细胞从一个培养器皿转移至另一个培养器皿 中培养。 再培养(Reculture) 单层细胞不经任何丢失而转移到新鲜培养基 中的过程。 ;集落形成率(Plating efficiency) 细胞接种到培养器皿内所形成的集落的百分率。 单个细胞 集落 克隆形成率(Cloningefficiency) 群体密度(Population density) 培养器皿内，每单位面积或体积中的细胞数(细 胞数/cm2)。 饱和密度(Saturation density) 特定条件下，培养器皿中能达到的最高细胞数 (细胞数/cm2或细胞数/cm3)。;培养基;基本培养基的组分 四大类物质 无机盐 氨基酸 维生素 碳水化合物 pH指示剂 酚红 ;常用基本培养基 RPMI 1640 应用最广泛 DMEM 高糖型 4500g/L 葡萄糖， 低糖型 1000g/L葡萄糖 HamF12 无血清培养基常用的基础培养 基 199 …… ;培养基的选择 培养细胞的首选培养基 常用培养基 根据细胞株特点、实验需要选择 用生长曲线、集落形成率等指标选择;培养基配制时的注意事项 严格按说明书要求添加必要成分 NaHCO3 谷氨酰胺 HEPES ------ 各成分顺序溶解 配制培养基用水、器皿 灭菌 分装、保存 ;培养基添加成分 NaHCO3 一般按说明书要求添加 封闭式培养用5.6%或7.4%液调节 谷