大熊猫和奶牛粪便中纤维素降解菌的筛选与鉴定-动物科学专业论文.docx

ii ii 独创性声明 本人声明，所呈交的学位（毕业）论文，是本人在指导教师的指导下独立完 成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作 了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本 研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯 他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位（毕业）论文作者亲笔签名： 日期： 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位（毕业）论文的规定，即学 校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅; 学校可以公布论文的全部或 部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密，在 年后解密可适用本授权书。 □ 不保密，本论文属于不保密。 □ 学位（毕业）论文作者亲笔签名： 日期： 指导教师亲笔签名： 日期： PAGE PAGE iii 摘要 本研究以大熊猫和中国荷斯坦奶牛粪便为实验对象，采用形态学观察、菌株的生理生 化实验、菌株的分子鉴定及酶活性测定等方法，筛选大熊猫和奶牛粪便纤维素降解菌，旨在 为寻找高效纤维素降解菌提供理论依据。 实验一：纤维素降解菌筛选。纤维素降解菌的筛选包括初筛和复筛两个阶段。初筛过 程是将粪样放入到液体发酵培养基中恒温震荡培养 3 d，然后将发酵液稀释并在固体培养基 平板中涂布，挑取单菌落进行纯化培养，然后将纯化后的菌株滴加到固体培养基中再进行培 养，之后用刚果红染色进行鉴定，选取透明水解圈较大的菌株。菌株的复筛主要是测定菌株 的 CMCase 和 FPAase 两种酶的酶活性，选取酶活性较高的菌株，进行后续的鉴定。本实验 分别从大熊猫和中国荷斯坦奶牛粪便样本各筛选出 5 株纤维素降解菌。 实验二：纤维素降解菌鉴定。纤维素降解菌的鉴定包括形态学观察、生理生化实验及 分子生物学鉴定等三个方面。形态学观察主要包括革兰氏染色并观察菌的形状，观察菌落的 颜色、形状、菌落大小、透明度、光泽度、质地、边缘特征及隆起形状等。生理生化实验参 照《伯杰氏细菌鉴定手册》的有关方法进行生理生化测定。包括糖醇的发酵实验、淀粉的水 解实验、V-P 实验、甲基红实验、氧化酶实验、接触酶实验及硝酸盐还原反应等。分子生物 学鉴定主要通过聚合酶链式反应，测定基因序列，并与 Genbank 基因库的已知序列进行比 对分析，鉴定菌株的种类。经鉴定从大熊猫和中国荷斯坦奶牛粪便中筛选得到的纤维素降解 株菌分别为白色链霉菌(NC020990)、假单胞菌（NC020209）、芽孢杆菌(NC021171)、克雷 伯菌(NC016612)、类芽孢杆菌(NC012914)和假单胞菌(NC020209)、志贺氏菌(NC007384)、 菠萝泛菌(NC013956)、嗜麦芽寡养单胞菌(NC010943)及类芽孢杆菌(NC012914)。 实验三：酶活性优化测定。本实验酶活性优化因素设定为 5 个，分别是培养时间、培 养温度、pH、接种量及装液量。通过单因素优化实验条件，测定菌株酶活性。大熊猫粪便 中所筛选的菌株产酶条件及产酶结果如下：白色链霉菌(NC020990)在 pH 为 7，温度 35℃， 装液量 30%，接种量 2.5%，摇床转速为 180 rpm 的条件下培养 36 h, CMCase 为最大值 24.732 U。假单胞菌（NC020209）在 pH 为 6，温度 25℃，装液量 30%，接种量 4%，摇床转速为 180 rpm 的条件下培养 36 h，CMCase 为最大值 24.362 U。芽孢杆菌(NC021171)在 pH 为 6.5， 温度 30℃，装液量 30%，接种量 2%，摇床转速为 180 rpm 的条件下培养 30h,CMCase 为最 大值 23.125 U。克雷伯菌(NC016612)在 pH 为 6.5，温度 30℃，装液量 30%，接种量 2%， 摇床转速为 180 rpm 的条件下培养 42 h，CMCase 为最大值 18.642 U。类芽孢杆菌(NC012914) 在 pH 为 7，温度 30℃，装液量 30%，接种量 2%，摇床转速为 180 rpm 的条件下培养 48h， CMCase 为最大值 9.234 U 通过单因素优化实验条件，测定菌株酶活性，中国荷斯坦奶牛粪便中所筛选的菌株产 酶条件及产酶结果如下：假单胞菌(NC020209)在 pH 为 6，温度 25℃，装液量 30%，接种量 4%，摇床转速为 180 rpm 的条件下培养 36 h, CMCase 为最大值 23.156 U。志贺氏菌(NC007384) 在 pH 为 7，温度为 35℃，装液量 40%，接种量 2.5%，摇床转速为 180 rpm 的条件下培养 42h，CMCase 为最大值 21.