番茄耐冷性RAPD分子标记的筛选及特异片段的克隆-蔬菜学专业论文.docx

新疆农业大学硕士学位论文 摘 要 本论文以番茄Lycopersicon esculentum Mill.耐冷品系 T9806 和 T9808 冷敏 感品系 T9801 及已构建好的耐冷性近等基因系 T9801 T9806 (BC7) T9801 T9808 (BC7)为材料 对其进行鉴定 从近等基因系群体中选取高度耐冷个体及高度冷敏感个体 各 10 株 分别建立耐冷基因池和冷敏感基因池 依据混合群体分组分析 (BSA)和近等基 因系 (NILs)原理和方法 进行 RAPD 实验 从 520 个 10 碱基随机引物中筛选出了三个在 两池间及其建池单株中具有多态性的引物 OPF-14 OPD-11 OPI-01 用 T9806 T9808 T9801 及 近等基因系群体单株 DNA 进一步验证 证明了这三个引物扩增出的特异性片段 OPF-14- 800 OPD-11-1200 OPI-01-2000 是三个与番茄耐冷基因连锁的 RAPD 标记 以 MAPMAKER 软件计算出耐冷基因片段与 OPF-14 OPD-11 OPI-01 标记间的遗传距离分别为 6.1 cM 9.8 cM 12.3 cM 选取其中遗传距离最小的多态性片段 OPF-14 进行克隆 用树脂 法从琼脂糖凝胶中回收了 OPF-14 扩增出的多态性片段 与载体 pGEMR-T-Easy 连接 转入大肠 杆菌 DH5- 通过蓝白斑筛选后 提取重组质粒 经 PCR 鉴定 回收的片段与 RAPD 扩增 所获得的差异性片段大小一致 对克隆片段测序表明实际大小为 792bp 并将此片段序列 在网上进行同源性比较 发现该片段与番茄抗 pto(细菌角斑病)基因同源 本实验为转化 成稳定的 SCAR 标记奠定了基础 有助于进一步开展番茄耐冷育种的分子标记辅助选择的 研究 关键词 番茄 耐冷性 RAPD 分子标记 克隆 1 番茄耐冷性 RAPD 分子标记的筛选及特异片段的克隆 Selection of RAPD Marker and Specific Fragment Clone for Cold Tolerance in TomatoLycopersicon esculentum Mill. YANG Rui (Vegetable Breeding ) Surpervised by Prof.ZHAO Fu-Kuan, Prof.LIN Cheng Abstract Tomato near isogenic lines of cold tolerance were used as experiment materials, 10 each of the cold tolerant and cold sensitive plants were selected for DNA extraction to develop tolerant and sensitive gene pools respectively. By the BSA,NILs and RAPD technique, 520 random decamer primers were used to amplify the two types of gene pools, 3 polymorphic specific fragments were detected and found from three primers (OPF-14 OPD-11,OPI-01).Using these primers to amplify the parents, NILs populations, the specific fragments were RAPD markers linked to cold tolerance of tomato. By the software Mapmaker/3.0, the OPF-14,OPD-11,OPI-01 markers were tested to be linked to the cold tolerance with genetic distance of 6.1 cM 9.8 cM ,12.3 cM respectively. Fragment OPF-14-800 was extracted from the agarose and mixed with pGEMR-T-Easy vector,then transferred into DH5- . Through white-blue colonies screening ,white clones w