改良大鼠逼尿肌细胞急性酶分离法及膜片钳应用钟晓12王青青3何.DOCVIP

改良大鼠逼尿肌细胞急性酶分离法及膜片钳应用 钟晓1,2，王青青3，何鹏1，邓建平3，李龙坤3,黄赤兵2，宋波1（第三军医大学西南医院泌尿外科，新桥医院泌尿外2科，新桥医院泌尿外1科，重庆 400038） 摘要：目的 改良大鼠膀胱平滑肌细胞急性酶分离方法，为利用膜片钳技术研究膀胱疾病提供必要的技术平台。方法 采用木瓜蛋白酶和胶原酶Ⅱ，采用一步法和二步法，分别消化5只新生和成年Wistar大鼠膀胱组织，在膜片钳工作台上分别对平滑肌细胞钠钙交换体电流行全细胞记录。结果 建立了稳定的新生和成年大鼠膀胱平滑肌细胞急性酶分离方法。新生大鼠NCX电流密度（pA/pF）为0.21±0.07（n=4），成年大鼠NCX电流密度为0.19±0.06（n=6），新生大鼠NCX电流密度与成年大鼠NCX电流密度大（P0.05）存在统计学差异。KB-R7943在5 um浓度下，有阻滞NCX正向模式的能力。结论 我们的方法改良了大鼠膀胱平滑肌细胞急性酶分离，并成功应用于膜片钳技术检测。 关键词：大鼠；膀胱；平滑肌；膜片钳 中图分离号：R694；R337.5 文献标识码：A An Improved method for Acute Single Bladder Smooth Muscle Cell Dispersion and Its Application in Patch-clamp Recording Zh