最新基因诊断和基因治疗.pptVIP

基因治疗的基本策略 基因干预 定义：采用特定的方式抑制某个基因的表达，或者通过破坏某个基因的结构而使之不能表达，以达到治疗疾病的目的。（区别于抗生素的基因水平调节） 基因治疗的基本策略 “自杀基因” 定义：自杀基因又称前体药物酶转化基因，这种基因导入受体细胞后可产生一种酶，它可将原来无细胞毒性或低毒药物前体转化为细胞毒性物质，将细胞本身杀死，这种基因被称为“自杀基因”，可以通过整合位点等选择目标细胞。 基因治疗的基本策略 免疫基因治疗 定义：通过将抗癌免疫增强细胞因子或MHC基因导入肿瘤组织，以增强肿瘤微环境中的抗癌免疫反应。 耐药基因治疗 定义：化疗过程中， 把产生抗药物毒性的基因导入患者体内，从而使患者能耐受更大剂量的化疗。 基因治疗的基本方法 治疗性基因的获得 在了解疾病发生的分子机制基础上， 选择对疾病有治疗作用的特定基因。 如，对单基因缺陷遗传病，可用野生型（非突变）基因即可用于治疗； 对于肿瘤，最好选择某些与该类肿瘤密切相关的癌基因或抑癌基因用于基因治疗。 治疗性基因的获得有赖对疾病病因和病理机制的深入研究 基因治疗的基本方法 基因载体的选择 基因治疗关键步骤之一，是将治疗基因高效转移入患者体内、并能调控其适度表达。 常用的载体有两类：病毒载体和非病毒载体。 病毒载体：逆转录病毒载体， 腺病毒载体， 腺相关病毒载体等； 非病毒载体：脂质体，受体介导等采用理化方法将治疗基因转移入患者体内。 基因治疗的基本方法 基因载体的选择 容易生产 持续表达 弱免疫源 复制、分裂和整合能力 能感染分裂期细胞和未分裂期细胞 四.基因诊断的常用技术方法 核酸分子杂交 是指单链核酸分子（DNA或RNA）在特定条件下，与另一条互补的特异核酸链形成稳定双链的过程。 碱基互补： DNA与DNA杂交： A=T、 G≡C DNA与RNA杂交: A=U、 G≡C 变性：在一定温度下，使核酸双链解开为两条单链； 复性：随温度逐渐恢复，变性的两条单链重新形成互补双链 四.基因诊断的常用技术方法 核酸分子杂交 利用核酸双链的碱基互补、变性和复性的原理，可以用已知碱基序列的单链核酸片段作为探针，与待测样本中的单链核酸互补配对，以判断有无互补的同源核酸序列的存在。 四.基因诊断的常用技术方法 Southern blot是早期基因诊断的主力 四.基因诊断的常用技术方法 FISH FISH荧光染色体原位杂交应用最为广泛 四.基因诊断的常用技术方法 点杂交Dot hybridization A C T G 探针杂交 NC膜 探针 正常人 突变纯合子 突变杂合子 突变型 野生型 PCR及相关技术 四.基因诊断的常用技术方法 PCR及相关技术 四.基因诊断的常用技术方法 正常人 患者 扩增 电泳 四.基因诊断的常用技术方法 核酸序列分析技术 正常对照 病例SOX9基因HMG box内发生单碱基置换突变 患儿 最直接、最确切的基因诊断方法 四.基因诊断的常用技术方法 限制性酶谱分析技术 最经典的基因诊断方法 H M N 四.基因诊断的常用技术方法 基因芯片 基因芯片技术是应用前景广阔的基因诊断技术 多基因多位点，基因表达分析，药物敏感分析 五.基因诊断的应用及意义 遗传性疾病的基因诊断 肿瘤的基因诊断 传染病的基因诊断 个体识别和物证分析 五.基因诊断的应用及意义 遗传性疾病的基因诊断 辅助遗传病的临床诊断 单基因遗传病的基因诊断 ：已不存在任何技术障碍 产前诊断：高危人群，优生优育 1.1kb 五.基因诊断的应用及意义 1.3kb 1.1kb 0.2kb 1 2 3 1、正常人 2、突变携带者 3、患者 1.1 kb 1.3kb 正常基因 突变基因 PCR-RE分析 MstII CCTGAGG-CCTGTGG 镰状红细胞贫血HBS-Beta株蛋白基因突变 五.基因诊断的应用及意义 遗传性疾病的基因诊断 疾病易感性及患病风险预测 遗传病患病风险分析： 常见遗传病遗传筛查， 疾病易感性预测性诊断：疾病易感基因检测 在一些有明显遗传倾向的肿瘤中，这二类基因的突变与肿瘤发生有密切关系 例： 视网膜母细胞瘤与RB基因 李-佛美尼症候群综合征与p53基因 乳腺癌与BRCA-1基因 五.基因诊断的应用及意义 肿瘤的基因诊断 检测异常表达基因：甲胎蛋白 检测肿瘤细胞基因变异：甲基化改变，序列改变 肿瘤易