十二烷基苯磺酸钠异辛烷正辛醇反胶束萃取苦参生物碱研究.doc

十二烷基苯磺酸钠异辛烷正辛醇反胶束萃取苦参生物碱研究 　　摘 要 利用阴离子表面活性剂十二烷基苯磺酸钠（SDBS）与溶剂异辛烷和助溶剂正辛醇形成反胶束体系，用于苦参生物碱的萃取分离。研究了pH值、表面活性剂浓度、增溶水量W0、盐种类及浓度等因素对萃取的影响。结果表明：SDBS-异辛烷-正辛醇反胶束体系对苦参生物碱具有良好的选择性和较高萃取率，在pH 5.0，增溶水量W0 25，0.05 mol/L SDBS，0.05 mol/L KCl，室温，萃取时间5 min，反萃取时间20 min的最佳萃取条件下，氧化苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱、苦参碱、槐果碱5种生物碱及总生物碱的萃取率和RSD分别在74.1%～87.2%和0.63%～3.0%之间。本方法选择性高，操作简便。 　　关键词 十二烷基苯磺酸钠； 反胶束萃取； 苦参生物碱； 高效液相色谱 　　 　　1 引 言 　　反胶束萃取法（Reversed micelles extraction）是利用表面活性剂，通过静电作用力，选择性溶解带电荷的物质进行分离。由于萃取条件温和，易保持物质活性，常用于分离蛋白质、氨基酸、酶等大分子生物活性物质，以及抗生素、金属元素的分离。 　　苦参是豆科植物苦参（Sophora Flavescens Ait）的干燥根，具有清热燥湿、杀虫、止痒等功效。其主要化学成分为苦参生物碱，具有抗肿瘤、抗心率失常、抗肝损伤及肝纤维化等多种功效。苦参生物碱作为一种新型的绿色农药近年逐渐应用于农业领域。苦参生物碱主要来源于苦参、山豆根等植物的提取分离苦，常采用溶剂萃取和离子交换等方法，其分离过程使用有机溶剂多，操作繁琐。本研究以水为溶剂，采用微波辅助提取苦参中生物碱，利用阴离子表面活性剂形成的反胶束萃取体系，在酸性条件下使苦参生物碱通过静电作用选择性地进入胶束“水腔”内核，从而与水提取液中的其它杂质分离。结果表明，采用十二烷基苯磺酸钠（SDBS） 　　Symbolm@@ 异辛烷 　　Symbolm@@ 正辛醇反胶束萃取体系，可较好地萃取分离苦参生物碱。本方法选择性高，设备简单，操作简便，有机溶剂残留少，可用于纯化和分离苦参生物碱。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　1200高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）; EXCEL全功能型微波化学工作平台（上海屹尧微波化学有限公司）。 苦参药材（产地山西，批号，苦参碱、氧化苦参碱（纯度＞98%，西安旭煌生物技术公司），氧化槐果碱、槐果碱、槐定碱（纯度＞98%，南京泽郎医药科技公司）；SDBS（分析纯，天津市福晨化学试剂厂）；异辛烷、正辛醇、KCl（分析纯，广州化学试剂厂）；甲醇、乙腈（色谱级，德国默克公司）；水为二次蒸馏水。 　　2.2 实验方法 　　2.2.1 SDBS-异辛烷-正辛醇反胶束的制备 称取适量SDBS，加入溶剂异辛烷/正辛醇（4∶1，V/V），超声溶解10 min；加入适量水， 在25 ℃恒温水浴中以180 r/min振荡2 h，静置过夜，配制成SDBS浓度为0.05 mol/L，增溶水量W0为25的SDBS-异辛烷-正辛醇反胶束萃取剂，其增溶水量W0按W0＝nH2O/nSur计算（W0：反胶束体系增溶水量即含水量；nH2O： 反胶束溶液中增溶水的摩尔数（mol）；nSur：反胶束溶液中表面活性剂的摩尔数（mol））。 　　2.2.2 苦参生物碱的提取及反胶束萃取 准确称取0.5 g苦参药材（过80目筛，0.18 mm粒径）于提取罐中，加入12.5 mL水，在功率780 W、温度110 ℃、压力1.52×106 Pa条件下提取5 min，提取液以3500 r/min离心10 min，合并上层清液，定容。 　　2.2.3 反胶束萃取分离苦参生物碱 取适量苦参生物碱提取液，用0.1 mol/L HCl调至pH 5.0，加入10 mL SDBS-异辛烷-正辛醇反胶束萃取剂，室温下搅拌5 min，转入分液漏斗中，静置，分层。将反胶束层取出，加入10 mL 1 mol/L KCl溶液，搅拌20 min，反萃取，转入分液漏斗，静置，反萃取两次，合并下层水相，定容。 经0.45 　　SymbolmA@ m滤膜过滤后，按下述HPLC条件测定，并计算萃取率E（%）， 萃取率为反胶束溶液增溶苦参生物碱的量（mg）与苦参药材提取液中苦参生物碱的量（mg）的百分比。 　　2.2.4 HPLC分析条件 Phenomenon Gemini C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 　　SymbolmA@ m），流动相：乙腈-甲醇-0.1%氨水，进样量：20 　　SymbolmA@ L，流速：1 mL/min，检测波长：220 nm； 柱温：室温，洗脱梯度：0 min，8.