锌对砷致大鼠睾丸损伤的保护作用以及睾丸金属硫蛋白的表达水平的分析.docVIP

- --- 表 1 BSA蛋白标准液的制备 孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 蛋白量（μl） 0 1 2 4 8 12 16 20 双蒸水（μl） 20 19 18 16 12 8 4 0 （3）准备待测样品：样品 1-20μl之内，蛋白质含量应所做标准曲线浓度范围之 内； （4）加适量体积样品到 96 孔板中，加双蒸水到 20μl； （5）各孔加入 200μlBCA 工作液，37℃放置 30min；蛋白浓度低时可延长反应 时间； （6）调酶标仪波长为 A562nm，测各孔吸光度，根据标准曲线计算出蛋白浓度。 （如图 1） 图 1 待测样品的蛋白浓度标准曲线 Figure 1 Scatterplot of sample protein concentrations 丙二醛(MDA)含量的测定 MDA测定的原理 过氧化脂质降解产物中的丙二醛（MDA）可与硫代巴比妥酸（TBA）缩合，形成 红色产物，在 532nm处有最大吸收峰。此法称为 TBA法 MDA的测定步骤 取样品按表 2 进行操作,然后用旋涡混匀器混匀,95℃水浴 40min,取出后流水冷 却,然后再以 3000r/min离心 10min,取其上清液用 756PC紫外可见分光光度计在 532nm处测定其吸光度。 MDA含量的计算 按照下面的公式计算睾丸 MDA含量，单位为：nmol/mgprot MDA的含量 = 测定