登革热室检测指南-中国疾病预防控制中心.PDFVIP

附件2 登革热实验室检测指南 一、目的 （一）及时发现、诊断病例。 （二）及时了解伊蚊媒介携带登革病毒状况。 （三）病毒分型和溯源。 （四）为登革热流行趋势的预测、预警和制定防治对策、措施提供科学依据。 二、检测对象 （一）疑似和临床诊断病例（按照登革热诊断标准WS216-2008 ）。 （二）伊蚊成蚊和幼虫。 三、样本采集、保存和运输 （一）临床标本采集 用无菌真空干燥管，采集患者非抗凝血，及时分离血清，分装2 份，保存于 带螺旋盖、内有垫圈的冻存管内，标记清楚后低温保存，其中1 份用于现场实验 室检测，1 份用于上级预防控制机构复核 （附件1，附表1）。 1.登革热临床诊断病例及疑似病例，每次采集血液标本5mL 。 2.登革热临床诊断和疑似的住院病例（包括初筛阴性），应采集双份血液标 本，入院当天和出院前1 天各一份。 3.疫点首发病例，必要时应采集第二份血标本，距第一份血样采集日期间隔 在7 天以上。 （二）蚊媒标本采集 疫点内采集的伊蚊成蚊及幼虫，分类鉴定后，填写媒介标本采集信息表，按 照采集地点分装，每管10-20 只。 （三）标本保存、运送 标本应-70℃以下保存，血液标本可-20 ℃以下保存，但不超过1 周。 标本运送时采用低温冷藏运输，避免冻融，样本运输应遵守国家相关生物安 全规定。 四、检测内容 （一）实验室检测 登革热疑似病例发生所在地医院和/或县（市）疾控机构采集病例血清，检 测登革病毒抗原、核酸或抗体，检测流程参见图1。 （二）复核检测 1.送市或省级疾病预防控制机构的临床标本，抽样30%进行复核检测，疫点 首发病例需采用病原学和/或双份标本血清学方法复核检测，暴发疫情复核检测 不少于5 例，疫情少于5 例者应全部检测，病毒核酸阳性标本应分型检测。 2.疫点首发病例，重症病例、输入病例急性期标本应采用PCR 方法进行分 型检测，阳性者分离病毒，从临床标本或所分离病毒中扩增E 蛋白编码基因， 完成序列分析。 3.每次暴发疫情应开展病毒全基因组序列分析。 4.实验室检测阴性临床病例以及重症病例，应对恢复期血清进行IgM、IgG 抗体和/或中和抗体检测。 （三）媒介标本检测 1.核酸检测 捕获的伊蚊成蚊或幼虫，进行核酸分型检测，并扩增病毒E 蛋白编码基因， 完成序列分析。 2.病毒分离 病毒核酸阳性的标本由国家、省或有条件的市级疾病预防控制机构进行病毒 分离、基因组序列分析。 图1 登革热疑似病例实验室检测流程 五、实验室检测方法 （一）临床标本检测 1、病原学检测 病原学检测主要适用于急性期血液标本。 （1）抗原检测：一般发病后6 天内血液标本NS1 抗原检出率高。标本中检 出NS1 抗原可以确诊病毒感染，适用于现场快速检测，可用于早期诊断（附件2 ， 3 ）。 （2 ）核酸检测：一般发病后6 天内血液标本病毒核酸检出率高。在病人血 清中检出病毒核酸，可确诊而且能够分型，可用于早期诊断，但核酸检测容易因 污染而产生假阳性，因此要求严格分区操作（附件4 ）。 （3 ）病毒分离：一般发病后5 天内血液标本病毒分离率较高。将标本接种 于蚊源细胞（C6/36 ）或哺乳动物细胞（BHK21 、Vero ）进行分离培养（附件5 ）， 出现病变以后，用检测抗原或核酸的方法鉴定病毒。分离到登革病毒可以确诊， 但其耗时长，不适于快速诊断。 2.血清学检测 血清学特异性抗体检测主要适用于发病5 天以后血液样本，但需注意可能与 其他黄病毒感染发生交叉反应。 （1）血清特异性IgM 抗体：采用ELISA 、免疫层析等方法检测。IgM 抗体 阳性，提示患者可能新近感染登革病毒，适用于登革热早期诊断，但单份标本不 能确诊（附件6 ）。 （2 ）血清特异性IgG 抗体：采用ELISA 、免疫荧光（IFA ）、免疫层析等 方法检测。患者恢复期血清 IgG 抗体阳转或滴度较急性期呈4 倍及以上升高可 以确诊（附件7 ，8 ）。 （3 ）中和抗体：采用空斑减少中和实验、微量中和实验等方