人类基因组DNA的提取_讲解材料.pptxVIP

人类基因组DNA的提取主讲人：协助者：人类基因组DNA提取的原理●根据材料来源不同，采取不同的材料处理方法，而后的DNA提取方法大体类似，但都应考虑以下原则：（1）防止和抑制DNase对DNA的降解；（2）尽量减少对溶液中DNA的机械剪切破坏，保持DNA分子的完整；（3）将蛋白质、脂类、糖类等物质分离干净。人类基因组DNA提取的原理●制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现的。这一方法获得的DNA不仅经酶切后可用于Southern分析，还可用于PCR的模板、文库构建等实验。人类基因组DNA提取的原理●SDS是一种去污剂，破坏细胞膜的脂质膜。●蛋白酶K是一种很强的蛋白水解酶，能消化各种蛋白质（包括糖蛋白和肽类）及脂类和胺类物质，但糖蛋白的降解物常与DNA一同沉淀下来，干扰酶的活性，消化后需要用酚、氯仿抽提纯化。●酚能变性蛋白质而且还能将变性的蛋白质溶解在其中。（加入1/3体积的饱和NaCl溶液，也可较好地祛除细胞降解物而纯化DNA，可以避免酚的污染。）人