Z-碳纳米管组装血红蛋白的直接电化学和-化学与材料教学示范中心.PPT

三、实验原理 实验报告格式与要求 格式： 一、研究背景 二、实验目的 三、实验原理 四、实验步骤 五、注意事项 六、结果与讨论 七、思考题 八、参考文献 要求：电子版 参照学院毕业论文格式（独立完成） * * 实验三十 碳纳米管组装血红蛋白的直接电化学和对过氧化氢的电催化研究 1、血红蛋白（Hemoglobin, Hb） 由两条α和两条β多肽链构成的四聚体 一、研究背景 分子结构庞大，电活性中心不易暴露 在电极表面的吸附造成蛋白构象变化和丧失活性 以及电极表面的钝化 在一般固体电极的电子传递速率很低，电子传递受阻 电子传递媒介体、促进剂、特殊电极材料 加速Hb的电子传递 3、血红蛋白结构类似于辣根过氧化物酶，有很高的类似过氧化物酶的催化活性。 2、血红蛋白直接电子转移的意义： 获得有关蛋白质或酶的热力学和动力学性质等重要信息。 Hb结构已知、价廉，被选作探讨生物大分子电化学行为的理想模型，用于开发新型生物传感器和生物反应器。 了解其在生命体内的电子转移机理和生理作用机制。 二、实验目的 1．了解模拟生物膜Hb-MWNT-Nafion 的制备方法 2.实现血红蛋白 (Hb)直接电子传递 2．学习Hb-MWNT-Nafion膜修饰玻碳电极对过氧化氢的电催化行为和催化机理 4．掌握测定血红蛋白催化过氧化氢的米氏常数的测定方法 将Hb直接吸附固定在经羧基化处理的多壁碳纳米管（MWNT） 和聚四氟乙烯（Nafion）薄膜中 Hb在一般固体电极的电子传递速率很低，电子传递受阻 实现Hb的直接电子转移 1、Hb的直接电子转移 2、血红蛋白对H2O2的催化 2Fe2+（ferro） + H2O2 → 2Fe3+ （ferro） + 2OH- Fe3+ （ferro） + e → Fe2+ （ferro） ferro-卟啉 3、米氏常数的测定 米氏常数(Km) 等于酶促反应达到其最大速率一半时的底物浓度[S] 表示酶和底物之间的亲和能力，Km值越大，亲和能力越弱 稳态条件下，类似于酶促反应的电催化过程，根据 Lineweaver-Burk方程可得 以1/i~1/[S] 作图，利用斜率和 截距可以计算出米氏常数 1、玻碳电极的预处理和循环伏安表征 预处理：玻碳电极用0.05μm的Al2O3粉抛光成镜面， 依次用无水乙醇及蒸溜水超声洗净，晾干。 循环伏安表征 电解质：1.0mM K3Fe(CN)6 0.1M KCl 混合液 （通氮除氧15min以上） 工作电极：玻碳电极 参比电极：饱和甘汞电极 对电极：铂丝电极 扫描速率：100 mV/s 电位范围：+0.6 ~ ?0.20 V 方法：线性扫描法 扫描方式：循环 灵敏度：3 要求：峰峰距ΔEp,80mV 四、实验步骤 2、纳米组装血红蛋白修饰电极的制备 0.5mg羧基化的MWNT、 4mg Hb中加入500μL水以溶解Hb， 100μL 0.5%Nafion溶液，再加入500 μL 无水乙醇，超声1h。 （由老师完成） 10μL 分散液滴涂于电极表面， 晾干，得Hb-MWNT-GCE 。 超声分散 不加MWNT以相似方法制得Hb-GCE。 Hb-GCE为对照电极（对照电极每大组每种各1支） 3、可溶性（即羧基化的）多壁碳纳米管的制备及表征 20mg MWNT 30mL 30% HNO3 170℃ 4h 冷却至室温 1000~2000 rpm 离心3min 去离子水洗涤到 pH值5~6 110℃烘箱干燥1h。 （由老师完成） 红外灯下恒重 红外表征 ， 与未处理的MWNT对照。 在电解池中放入25.00mL （或10.00mL）0.1M pH=7.0 的 磷酸缓冲溶液，通氮除氧15min以上。 分别以Hb-MWNT-GCE、Hb-GCE为工作电极， 记录循环伏安曲线。 观察底液中是否有氧化还原峰 参数： 扫描速率：100 mV/s 电位范围：从+1.0 ~ ?1.5 V 方法：线性扫描法 扫描方式：循环 灵敏度：3 4、血红蛋白的直接电化学 加入25 μL 1mol/L H2O2溶液, 使电解池中H2O2的浓度为1.0 mmol/L。 分别以Hb-MWNT-GCE、Hb-GCE为工作电极， 记录循环伏安曲线。 观察氧化峰和还原峰哪个更大。 参数：（扫描速率：100 mV/s 电位范围：从+1.0 ~ ?1.5 V 方法：线性扫描法