格氏栲居群遗传多样性研究-地理学、自然地理学专业论文.docxVIP

格氏栲居群遗传多样性研究 格氏栲居群遗传多样性研究 福建农林大学 福建农林大学 2011 届硕士学位论文 PAGE PAGE III IV IV 摘 要 格氏栲属国家重点保护植物，是特产于我国中亚热带地区南缘的第三纪孑遗植物，由于人为破坏、自 身生物学特性及自然环境等因素的综合作用，格氏栲资源已趋于枯竭。生物学因素是影响格氏栲种群 濒危的主要因素之一，其中遗传结构、演化过程与物种濒危有着密切关系。为此，笔者首次应用 ISSR 分子标记技术对不同地理分布的格氏栲居群进行遗传多样性分析，主要研究结果： （1）利用改良的 CTAB 方法从格氏栲叶片中提取的 DNA，产量高、质量好，均能满足 ISSR 分析 要求； （2）对格氏栲 ISSR-PCR 反应体系进行优化，筛选出适合格氏栲的反应最佳体系，其扩增谱带清 晰、多态性强，稳定性好。也参考一般 ISSR 分析反应程序，通过正交试验，确定适合格氏栲 ISSR-PCR 扩增程序为：94℃预变性 5 min；94℃变性 30 s；52℃退火 45 s；72℃延伸 1.5 min，变性。延伸，循 环 34 次；最后 72℃延伸 10 min。PCR 扩增的体系（总体积 20 μL）为：模板 DNA 20 ng，dNTP 0.10 mmol/L，10×PCR Buffer 2.0 μL，引物 0.2 μmol/L，Taq 酶 0.75 U，ddH2O11.3 μL，MgCl22.0 mM； （3）格氏栲居群遗传多样性 ISSR 分析。采用 10 条 ISSR 引物对 74 份不重复的格氏栲个体样本 进行 PCR 扩增，每条引物均能产生清晰条带，共扩增出 113 条带，其中 98 条为多态性带，多态性比 率为 86.73%，较高的多态性表明格氏栲在物种水平上具有丰富的遗传多样性。借助 SPSS13.0 软件分 析 ISSR 表型数据矩阵，计算各样品间的相似系数，建立亲缘关系聚类树状图，并以 GD=0.19 为界， 结合聚类分析图，可将 74 份格氏栲种质分为三大类：第一类群包括了 43 份材料，主要为南平、三明 和江西居群；第二类群包括了 8 份材料，以龙岩和建宁居群为主；第三类群包括了 23 份材料，主要为 广东和广西居群。可见格氏栲居群间分子系统格局与其地理空间格局基本一致，存在显著正相关。由 于地理距离接近，气候类型相似，基因交流可能性较大，因而遗传距离较小；反之地理距离较远，生 态因子变化较大，格氏栲自然选择的压力则不同，在进化中形成了较大的遗传距离。聚类分析结果与 地理自然分布规律基本一致，可结合野外种群调查与分子标记技术来评价格氏栲资源遗传多样性，进 一步探讨格氏栲种群的亲缘地理学与遗传结构的时空变化规律。 （4）POPGENE 分析结果表明，格氏栲居群具有丰富的遗传多样水平（多态百分率 PPB =86.73%， Nei’s 基因多样度 H=0.2791，Shannon’s 信息指数 I=0.4246）。总的遗传变异中有 46.23%存在于居群间， 居群内的遗传变异为 53.77%，表明格氏栲居群间和居群内都存在比较显著的遗传分化。UPGMA 聚类 分析反映出格氏栲种群遗传距离与地理距离存在正相关性。依据格氏栲种群遗传学和生态学的研究结 果，提出应加大对遗传多样性高的格氏栲种群保护力度，加强对各种群内的个体进行相互移栽和采种 育苗移栽，促进种群间的基因流动，使各种群遗传多样性保持平衡，以最大限度地保存格氏栲资源的 遗传多样性。 关键词：格氏栲； ISSR；遗传多样性；保护策略 Abstract Castanopsis Kawakamii is at the risk of becoming extinct in the wild，which has been classified as national key protected plants．It particularly distributes in the southern margin of the subtropical region in China．Due to human disturbance and natural factors，C．Kawakamii resources have been highly endangered．The biological factors including genetic structure，genetic variation and genetic evolution may be the main reseaon which influences C．Kawakamii populations in danger．Therefore，We used ISSR m