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对快速高分离液相色谱的应用 Agilent 6540 超高解析度 -TOF 比热电 LT Orbitrap XL 具有更出色的分辨率 技术概述 摘要 质谱分辨率具有不可否认的价值，并且在精确质量分析中是选择液质系统的一个重要评 判标准。质量分辨率可以分辨出在液相分离过程中共洗出的近同位素成分。超高分辨率 在过去复杂和昂贵的傅立叶变换离子回旋共振 (FT-ICR) 装置独占鳌头，现如今许多实验室 所使用的轨道阱和最新的安捷伦 -TOF 系统也实现了超高分辨率。除了分辨率外，分析 速度也很重要。质谱实验室面临样品分析周期和研究完成时间的压力。许多实验室已经 发现超高性能液相色谱(UHPLC)在提高色谱分离度和缩短分析时间方面具有巨大的优势。 本技术概述说明：当采集光谱的速率和 分析兼容时， 超高解析度 UHPLC Agilent 6540 (UHD) 精确质量 -TOF LC/MS 系统较热电科技 LT Orbitrap XL 系统的分辨率高出十倍。 前言 在代谢组学、蛋白质组学和食品安全等领域，很多实验室都引进了UHPLC 以应对复杂的 样品化合物以及提高分析通量的需求。由于工作效率要求不断地提高，UHPLC 能实现更 好的分离、缩短液相色谱的运行时间并可以使分析工作者优化分析通量，因此也越来越 具有吸引力。 快速、高分离度的分离为降低离子抑制及缩短分析方法的时间和更高的样品分析通量提 供了双赢。色谱法伴随样品复杂性的增加、近同位素分析和干扰可能带来色谱峰的重叠， 精确质量质谱可以提供另一种分辨率方法去判定未知样品，确保能够准确鉴定未知样品 并且可靠分析目标化合物，所有的这一切可以被快速液相光谱数据采集速率来实现。 本应用探讨了当快速液相分析必须在高采 集速率条件下使用时， gilent 6540 超高 A 解析度(UHD) 精确质量 -TOF LC/MS 系 统的分辨能力。同时安捷伦系统的分辨率 与热电科技的LT Orbitrap X L 系统作了 比较，明确地证明了在这种适用条件下， 安捷伦的质量分辨系统要更胜一筹。 结果与讨论 用UHPLC 进行样品的分离，峰宽可以小 到 秒。通过分离化合物获得很窄的色 0.5 谱峰能够降低干扰离子化过程的离子抑制 作用，但窄峰对 测设备的速度提出了新 的要求。在如图 所示，数据采集速率一定 1 要和色谱峰宽匹配，与UHPLC 联用的质 谱系统能够快速获得光谱而不损失分辨率、 精确质量、灵敏度、动态范围或者同位素 精确性。与大多数的同类型仪器不同，耐 用的安捷伦飞行时间质谱 （ ）和四极 T OF 杆 飞行时间 系统接受了这种挑战。 - ( -TOF) Agilent 6540 UHD Q-TOF 在 速数据采 集中保持了 分辨率 为证明与 UHPLC 联用的Agilent 6540 图1. 从UHPLC/MS 运行中快速数据采集速率萎缩氨酸峰提供更好的精确度。 色谱仪能够接受的最低计数点为 10- 12 的性能，图 列出了数据采集 UHD -TOF 2 速率与质量分辨率函数关系。注意：在非 常高的数据采集速率下分辨率保持了相对 稳定，只是在低于368 /z ，分辨率低于 50000 45000 35000 ，对研究的大多数质量，分辨率均 40000 高于 。 n GDVAFVK (m/z 368.2) 40000