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实验十 大分子物质的水解试验 目的要求 1、证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。 2、掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。 实验原理 微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质分解，才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小的化合物，使其能被运送到细胞内。胞外酶将大分子物质的分解过程可以通过观察细菌菌落周围物质的变化来证实。 淀粉水解试验：淀粉酶 明胶水解试验：明胶酶 实验材料 1. 枯草芽胞杆菌，大肠杆菌 2. 固体淀粉培养基，明胶培养基试管 3. 卢戈氏碘液 实验方法 淀粉水解试验 培养基：淀粉培养基平板 菌种：大肠杆菌和枯草芽胞杆菌 方法：平板上划十字接种，培养48h 注意：接种前在平板底部作记号，十字不要太大 明胶液化试验 培养基：试管明胶培养基 菌种：大肠杆菌和枯草芽胞杆菌 方法：穿刺接种，培养5d 注意：20 ℃培养 分别记录试验菌种对淀粉水解、明胶液化试验的结果。以“＋”表示阳性，“－”表示阴性。 实验报告 糖发酵培养基 蛋白胨5g，氯化钠2.5g，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1ml，水500ml，Ph7.6。 每管加7ml，内装倒置小管，121℃灭菌20min。 吸取培养液，排空其中空气，将针头伸到杜氏小管底部，缓缓将 培养液推入杜氏小管直到凸起，再至过量以至培养液润湿杜氏小管 外表，因培养液具有一定粘滞力，它可使湿润的杜氏小管贴着试管放入时慢慢滑到试管底部。 德汉氏小管的放置方法：首先将试 管中7ml培养液，然后用注射器吸 20%乳糖、葡萄糖 各取20g加水100ml，各分装3瓶，112℃灭菌30min。 第1组：葡萄糖蛋白胨水培养基 蛋白胨3g，葡萄糖3g，磷酸氢二钾1.2g，水600ml，Ph7.0-7.2，分装于70支试管中，112℃灭菌30min。 第2组：柠檬酸盐培养基 NH4H2PO4 0.2g，K2HPO4 0.2g，NaCl 1g，MgSO4 40mg，柠檬酸钠0.4g，琼脂4g，调pH6.8，1%溴香草酚蓝乙醇液2ml，水200ml，分装于20支试管中， 121℃灭菌20min。 第3组：硝酸盐还原培养基 蛋白胨1.25g，氯化钠0.625g，硝酸钾0.25g，水125ml，pH7.4， 分装于16支试管中，121℃灭菌20min。 第4组：硫化氢试验养基 蛋白胨5g，氯化钠1.25g，柠檬酸铁铵125mg，硫代硫酸钠125mg，琼脂5g，水250ml。先将琼脂、蛋白胨融化，冷至60 ℃时加入其他成分，调 pH7.2，分装于35支试管中， 112℃灭菌20min。 * * * *