电刺激对大鼠横断视神经视网膜节细胞的影响-临床医学;外科学(神外)专业论文.docx

第四军 第四军医大学硕士学位论文 - - 电刺激对大鼠横断视神经视网膜节细胞的影响 硕士研究生：马 炜 导 师：高国栋 教授 辅 导 教 师：李 江 副教授 第四军医大学唐都医院神经外科，西安 710038 资助基金项目：陕西省自然科学基础研究计划项目（S2011JC5277） 中文摘要 关键词：视网膜神经节细胞；电刺激；神经保护 成年哺乳类动物中枢神经系统(central nervous system, CNS)的损伤和修复一 直是学术界研究的热点和难点。中枢神经系统损伤后由于神经元缺乏分裂增殖能 力，常常导致其功能的永久性缺陷。视网膜和视神经是脑的衍生物，属于中枢神 经系统的一部分。视网膜来源于神经外胚层，视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells, RGCs)是视网膜内唯一一类向脑内投射的神经元，位于视网膜最内层的神经 节细胞层。视神经由视网膜神经节细胞的一段轴突组成，属于中枢神经系统白质。 由于 RGCs 的胞体以及有髓轴突可以分开处理，使用视网膜平铺技术可以计数整 个视网膜中视网膜神经节细胞的数量，因此视神经被认为是研究中枢神经系统损 伤最重要的模型之一。中枢神经系统在遭受外伤等因素损伤后往往导致神经元的 死亡及轴突的退化。学者们尝试应用多种不同的方法如神经营养因子、激素、药 物等来促进神经元的存活及轴突的再生。电刺激作为一种物理疗法，被广泛应用 于神经系统损伤后的恢复。在周围神经系统和中枢神经系统中，电刺激的保护作 用都能被观察到，体内和体外实验都已证明了即刻短暂时间的电刺激能够提高视 神经损伤后 RGCs 的存活率以及细胞轴突的向外生长。然而在中枢神经系统中以 短程单次电刺激时神经元的存活并不明显而且数量非常有限，本实验采用大鼠视 神经横断模型，探讨慢性电刺激对视网膜节细胞存活的影响及机制。本实验的第 一部分，研究慢性电刺激对视神经横断视网膜节细胞存活的影响。在 SD 大鼠中， 分离暴露右眼视神经并于球后 1.5mm 处进行横断，在断端处放置蘸有 5%荧光金 的明胶海绵，用以逆行标记 RGCs。电刺激治疗组为分离横断视神经后给予电刺 激，对照组为横断视神经后给予假性电刺激。结果显示，在 7 天、14 天电刺激治 疗组存活的 RGCs 数目明显高于对照组并且电刺激组中在一定范围内距离电极点 越近，存活的 RGCs 的数目越多。本实验第二部分，研究电刺激对视神经横断视 网膜节细胞的保护作用机制。我们对电刺激组和对照组进行了免疫组化，发现在 7 天和 14 天电刺激组的小胶质细胞表达量明显减少，激活被抑制。Western blot 的结果进一步证实，电刺激对小胶质细胞具有抑制作用。我们的结果显示慢性电 刺激对视神经横断视网膜神经节细胞具有保护作用其机制可能是抑制了小胶质细 胞的活性。 Study on the electrical stimulation of axotomized retinal ganglion cells in rat eyes Candidate for master: Ma Wei Supervisor: Gao Guodong Tutor: Li Jiang Department of Neurosurgery, Tangdu hospital, Fourth Military Medical University, Xi’an 710038, China Sponsored Programs: Shaanxi Provincial Natural Science Foundation project Abstract Key words：Retinal ganglion cells; Electrical stimulation; Neuroprotection Adult mammalian central nervous system damage and its repair has always been hotspot and difficulty in academic research. Injury of central nervous system (CNS) usually leads to permanent defects because of neurons lack the ability to proliferate. Retina and optic nerve are derivatives of CNS. Retina derived from the neural ectoderm and retinal ganglion cells are only in the retina to the projection neu