弓形虫多价亚单位疫苗免疫保护性的研究-病原生物学专业论文.docx

H H 60“98 研究生导师简介：黄炳成，男，1962年8月生，副研究员，现任山东省 寄生虫病防治研究所分子医学部副主任，主要从事分子生物学及免 疫学研究。 课题指导小组简介： 甄天民，男，1968年3月生，研究员，现任山东省寄生虫病防治研 究所副所长，主要从事昆虫学、分子生物学及免疫学研究。 程义亮，男，1935年3月生，研究员，曾任山东省寄生虫病防治研 究所所长，主要从事寄生虫学研究。 王金祥，男，1952年6月生，研究员，现任山东省寄生虫病防治研 究所业务办公室主任，主要从事分子生物学及免疫学研究。 韩广东，男，1952年9月生，研究员，现任山东省寄生虫病防治研 究所分子医学部主任，主要从事分子生物学研究。 李桂萍，女，1943年3月生，研究员，现任山东省寄生虫病防治研 究所分子医学部科员，主要从事免疫学研究。 葛凌云，女，1942年10月生，研究员，曾任山东省寄生虫病防治研 究所临床部主任，主要从事寄生虫病防治研究。 学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文 学位论文独创性声明 本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文 中引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上 已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或 成果。 学位论文知识产权权属声明 本人在导师指导下所完成韵论文及相关的职务作品，知识产权归属山东省医 学科学院。山东省医学科学院享有以任何方式发表、复制、公开阅览、借阅以及 申请专利等权利。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论 文或成果时，署名单位仍然为山东省医学科学院。 论文作者签名 日期：!=￡年蔓月二兰|-同 导师签名：立．』堕星￥ 日期：至翌竺年—￡月』互R 弓形虫多价亚单位疫苗免疫保护性的研究 弓形虫多价亚单位疫苗免疫保护性的研究 专业：病原生物学 研究生：陈少卿 导师：黄炳成副研究员 中文摘要 弓形虫灭活疫苗免疫保护力低，减毒活疫苗易恢复毒力Il】，不能用于人体，故 弓形虫亚单位疫苗成为一个新的研究方向i2】。目前弓形虫亚单位疫苗虽比灭活和减 毒活疫苗安全，但候选抗原的免疫原性弱，不能提供足够的免疫保护力。即使弓 形虫抗原中公认的免疫原性较好，最有希望的疫苗候选抗原——P30蛋白，也只能 刺激机体产生一定的免疫保护作用[31。因此，筛选弓形虫免疫原性强的抗原或抗原 组合和如何提高候选抗原的免疫原性、调节免疫应答强度和类型【4、5“一】，产生有 效和持久的保护性免疫成为研制弓形虫疫苗亟待解决的关键问题。 本研究应用SDS．PAGE电泳对弓形虫体粉碎抗原进行分离、纯化，选择特异 性抗原组分进行配伍，然后与福氏完全佐剂混合免疫小鼠，通过免疫学检测评价 抗原刺激机体产生的免疫水平，并根据免疫鼠抵抗弓形虫感染情况，评估弓形虫 抗原组合的免疫保护作用。结果发现，弓形虫RH株虫体抗原SDS．P：AGE电泳显 示有7条特异抗原蛋白带，对其中4条(P67、P35、P30、P22)分离纯化配伍后 分别免疫小鼠，发现各实验组小鼠脾脏CD4+、CDs+T淋巴细胞及其培养液中IL．2、 IFN-：的滴度均随免疫聃间延长而增加，其中以P30／35配伍组增高最显著，并且 该组合诱导的保护力也最强，攻击感染后平均存活时间明显长于其他实验组和对 照组(P0．05)，表明P30／35蛋白组合的免疫原性较强，可作为弓形虫亚单位疫苗 的候选抗原。筛选出抗原后，又对亚单位疫苗必须的免疫佐剂进行了优化，用无 毒副作用的拟菌颗粒、脂磷壁酸、蜂胶分别和弓形虫P30，35特异蛋白组分混合、 碾磨、免疫小白鼠，并以福氏完全佐剂作对照，观察佐剂效果。结果显示拟菌颗 粒佐剂能显著增强弓形虫P30／35抗原刺激机体产生的细胞免疫、体液免疫和免疫 保护力。拟菌颗粒佐剂组小鼠产生的IL．2较福氏完全佐剂稍低，但明显高于其它 实验组和对照组(P均0，01)；IFN-Y和CD4+、CDg+T淋巴细胞计数与福氏完全佐 荆比较无显著性差异(P均o．05)，产生的IgG抗体水平则显著高于福氏完全佐剂 组(P0．01)，并且拟菌颗粒辅助P30／35抗原抵抗弓形虫攻击感染后的存活时间比 无佐剂辅助的P30／35抗原对照组延长79．8％，也与福氏完全佐剂组相比无显著性 差异，而脂磷壁酸和蜂胶的佐剂效果与拟菌颗粒和福氏完全佐剂相比较差(P均O．01)，显示拟菌颗粒佐剂具有提高P30／35抗原的免疫原性和增强免疫应答的良 差异，而脂磷壁酸和蜂胶的佐剂效果与拟菌颗粒和福氏完全佐剂相比较差(P均 O．01)，显示拟菌颗粒佐剂具有提高P30／35抗原的免疫原性和增强免疫应答的良 好作用。将筛选的弓形虫P30／35抗原与拟菌颗粒佐剂制成的多价亚单