登革热患者尿液中病毒核酸检测及其临床意义-内科学(感染病学)专业论文.docx

万方数据 万方数据 硕士研究生学位论文 登革热患者尿液中病毒核酸检测 及其临床意义 Clinical Significance and Detection of DENV-RNA in Urine from Dengue Fever Patients 课题来源：国家临床重点专科建设项目经费资助 专 业：内科学（感染病学） 学位申请人：邱 爽 导 师：张复春 教授 广州医科大学·广州 2014 年 5 月 目 录 HYPERLINK \l _bookmark0 中文摘要1 HYPERLINK \l _bookmark1 英文摘要6 HYPERLINK \l _bookmark2 主要英文缩写词 12 HYPERLINK \l _bookmark3 前 言13 HYPERLINK \l _bookmark4 一、材料21 HYPERLINK \l _bookmark5 二、方法23 HYPERLINK \l _bookmark6 三、结果29 HYPERLINK \l _bookmark7 四、讨论35 HYPERLINK \l _bookmark8 五、结论37 HYPERLINK \l _bookmark9 参考文献38 HYPERLINK \l _bookmark10 综 述41 HYPERLINK \l _bookmark11 致 谢49 登革热患者尿液中病毒核酸检测及其临床意义 登革热患者尿液中病毒核酸检测及其临床意义 登革热患者尿液中病毒核酸检测及其临床意义 专 业：内科学（感染病学） 学位申请人：邱 爽 导 师：张复春 教授 中文摘要 登革热是由登革病毒（DENV）引起的一种急性传染病，是全球热带及亚 热带地区主要的公共卫生问题，对人类健康和公共卫生安全构成了重要威胁。 登革热需要借助实验室诊断才能确诊，通过 RT-PCR 方法检测 DENV-RNA，是 一种快速、敏感、特异的实验室诊断方法，其常用的检测标本为血标本，但存 在病毒血症期短，采集血标本有创、不方便等缺点，尿液较血标本有经济、方 便、安全无创等优点，尿液中 DENV-RNA 检测能否用于登革热的确诊？国外 研究很少，国内尚无研究。因此，明确尿液中 DENV-RNA 检测对登革热确诊 的价值，对于提高登革热的诊治水平有重要意义。 一、研究目的 本研究拟建立一种通过尿液检测 DENV-RNA 的实验室方法，并探讨其临 床意义。 二、对象 1.实验组：2013 年 8-11 月广州市第八人民医院收治的 57 例登革热住院病人， 其中登革热（DF）42 例，重症登革热（SDF）15 例。采集病人 73 份血浆和病 程早中晚期的 158 份系列尿液标本开展实验研究。 1.1 57 例登革热病人平均年龄为 37.5 岁（7-74 岁）。男性有 35 例，女性 有 22 例。 1.2 73 份血浆对应 51 例登革热病人（人均 1-2 份），在病程早期（发病 1-5 天）、病程中期（发病 6-9 天）和病程晚期（发病 10-14 天）分别有 35 份，33 1 广州医 广州医科大学硕士学位论文 份，5 份血浆；还有 6 例病人未采集到血浆。 1.3 158 份尿液对应 57 例登革热病人（人均 2-3 份），在病程早期、中期和 晚期分别有 56 份、76 份和 26 份尿液。 2.对照组：包括非登革热病人组和健康人组各 10 例，每人各有 1 份尿液标 本，共 20 份。非登革热病人组包括艾滋病病人组 5 例，乙肝病人组 5 例。 三、方法 1.确诊登革热患者 查阅病历资料，对 57 例登革热病人的临床表现及病原学检测结果进行汇 总，依据 2009 年 WHO 颁布的《登革热诊断、治疗以及防控指南》，可判断 57 例登革热病人均达到实验室确诊标准，并可区分 DF 患者和 SDF 患者。 2.标本的收集与保存 2.1.采集尿液，每份留取 5-10ml，在 2h 内以 2000 转/分离心 10min，取上 清液分装至 1.5ml 微量离心管中，-80℃冰箱中保存，避免反复冻融； 2.2.采集新鲜抗凝血 5ml，迅速分离血浆，分装至 1.5ml 微量离心管中，-80 ℃ 冰箱中保存。 3.采用 ELISA 检测血浆中抗 DENV-IgM 和 IgG 抗体 使用澳大利亚 PanBio 公司生产的 PANBIO DENGUE IgM CAPTURE ELISA 试剂盒和 PANBIO DENGUE IgG CAPTURE ELISA 试剂盒，分别检测登 革热病人急性期血浆中的抗 DENV-IgM 和 IgG 抗体。 3.登革热病人初次感染和二次感染的判断 若抗 DENV-IgM 阳性同时抗 DENV-IgG 阴性，可判断为初次感染；若抗 DE