细胞生物研究方法1.ppt

CELL BIOLOGY;第一章 绪论 第二章 细胞基本知识概要 第三章 细胞生物学研究方法 第四章 细胞质膜与细胞表面 第五章 物质跨膜运输与信号传递 第六章 细胞质基质与内膜系统 第七章 细胞的能量转换 第八章 细胞核与染色体 第九章 核糖体 第 十 章 细胞骨架 第十一章 细胞增殖及其调控 第十二章 细胞分化与基因表达调控 第十三章 细胞衰老与凋亡 ;第三章细胞生物学研究方法;第三章 细胞生物学研究方法;Caenorhabditis elegans;本章内容提要;;;1. 构成： ①照明系统:光源、折光镜和聚光镜，有时附加滤光片控制光的波长。 ②光学放大系统:目镜和物镜组成。 ③机械装置 2. 原理：经物镜形成倒立实像，经目镜放大成虚像。;;;Light Pathway of Microscope ;3. 分辨力：指分辨物体最小间隔的能力。 光学显微镜的分辨力 R=0.61λ/N．A． 其中λ为入射光线波长； N．A．为镜口率 ＝ｎsinα/2， n=介质折射率； α=镜口角（样品对物镜镜口的张角） 。;显微镜的几个光学特点： 介质折射率越接近镜头玻璃的（ 1. 7 ）越好。 sin α /2的最大值小于1；油镜介质为香柏油，镜口率可接近1.5。 普通光线的波长为400~700nm，光镜分辨力约为0.2μm，人眼的分辨力为0.2mm，因此显微镜的最大有效倍数为1000X。;光镜样本制作;（二）荧光显微镜 Fluorescence microscope;原理;Fluorescence image, DNA in blue and Microtubules in green;直接荧光标记技术;（三）激光共聚焦扫描显微境 Laser confocal scanning microscope, LCSM;laser confocal scanning microscope, LCSM;激光共聚焦扫描显微镜光路图(原理);LCSM Image of a Xenopus Melanophore (爪蟾黑色素细胞） microtubule cytoskeleton (green) and the nucleus (blue) /;;把透过标本的可见光的光程差或相位差转换成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。可用于观察活细胞。在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处。 环形光阑（annular diaphragm）：位于光源与聚光器之间。 相位板（annular phaseplate）：物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。;相差显微镜原理;可用于观察活细胞;用途：观察未经染色的玻片标本;（五）微分干涉相差显微镜 Differential interference contrast microscope （DIC）;微分干涉显微镜原理;（六）录像增差显微镜技术（video-enhance microscopy） 计算机辅助的微分干涉显微镜可在高分辨率下研究活细胞中的颗粒及细胞器的运动;（七）暗视野显微镜 dark field microscope;（八）偏光显微镜polarizing microscope;（九）当代显微镜的发展趋势;二、电子显微镜;以电子束作光源，电磁场作透镜。电子束波长与加速电压(通常50~120KV)的平方根成反比。 由电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、记录系统、电源系统等5部分构成。 分辨力0.2nm，放大倍数可达百万倍。 用于观察超微结构（小于0.2μm）。;透射电子显微镜;电子显微镜的基本构造;TEM LIGHT PATHWAY;电镜与光镜的比较;电镜与光镜光路图比较;2、制样技术;超薄切片机;样本制备示意图;(2) 负染技术（Negative staining）;金属投影;(3) 冰冻蚀刻 freeze-etching;技术示意图;an onion root tip cell with no etching.;培养细胞内面的深度蚀刻电镜照片，示 Clathrin衣被;快速冷冻深度蚀刻技术;(4) 电镜三维重构技术 电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合而形成的具有重要应用前景的一门新技术。电镜三维重构技术与X-射线晶体衍射技术及核磁共振分析技术相结合，是当前结构生物学（Structural Biology,主要研究生物大分子空间结构及其相互关系)的主要实验手段。;20世纪60年代问世，用来观察标本表面结构。 分辨力为6~10nm，由于人眼的分辨力（区别荧光屏上距离最近两个光点的