木薯淀粉分支酶活性测定方法比较研究.PDFVIP

中国农学通报 2016,32(33): 193-198 Chinese Agricultural Science Bulletin 木薯淀粉分支酶活性测定方法比较研究 郭运玲，孔 华，左 娇，黄启星，贾瑞宗，郭静远，周 霞，郭安平 （中国热带农业科学院热带生物技术研究所，农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室，海口571101） 摘 要：旨在找到木薯淀粉分支酶活性有效测定方法。以成熟期的木薯块根为材料，对现有的淀粉分支 酶活性测定方法从酶液提取液、酶液浓度、反应体系、反应时间和酶反应终止方式作了比较和改进。木 薯淀粉分支酶活性测定的有效方法：取0.5 g 成熟木薯块根，加入提取液研磨成浆，离心后上清为粗酶 液，粗酶液稀释后加0.5%可溶性淀粉，37℃恒温水浴中保温10 min 后置沸水浴中终止反应，再加碘液显 色反应10 min 后测定波长660 nm 处吸光度值，每降低一个百分率的碘蓝值即为木薯淀粉分支酶SBE 的 一个活性单位(U)。改良后的淀粉分支酶活性测定方法能很好的区分木薯不同株系淀粉分支酶活性差 异，实验重复性好，操作简单、快捷。 关键词：木薯；淀粉分支酶；活性；测定方法 中图分类号：S533 文献标志码：Ａ 论文编号：cas ComparisonofActivityMeasuringMethodsofCassavaStarchBranchingEnzyme GuoYunling,KongHua,ZuoJiao,HuangQixing,JiaRuizong,GuoJingyuan,ZhouXia,GuoAnping (KeyLaboratoryofTropicalCrops,MinistryofAgriculture,InstituteofTropicalBioscienceandBiotechnology, CATAS,Haikou571101) Abstract:Aneffectivemethodformeasuringactivityofstarchbranchingenzymewasdevelopedinthisstudy. Tuberousrootsofmaturecassavawerecollectedasmaterialstostudyvariousreactionparametersofthestarch branchingenzyme(SBE),includingextractingsolutionofenzyme,enzymeconcentration,reactionsystem, reactiondurationandterminationmethods.Finally,weintroducedanimprovedmethodfordetectingactivityof cassavastarchbranchingenzyme.Firstly, 0.5 grootofmaturecassavawasgroundintopulpwithextracting solution.Then,thecrudeenzymesolutionwasobtainedfromthesupernatantaftercentrifugation.Thecrude enzymesolutionwasdilutedandaddedwith 0.5%solublestarchat 37℃waterbathfor 10min.Then,the reactionwasterminatedbyboilingwater.IodinesolutionandKIwereaddedtoconductchromogenicreaction for 10min.Theactivityofenzymewasmeasuredat 660nm.OneunitofcassavaSBEactivitywasdefinedas theamountofsubstratecausing 1%decreaseinabsorbanceofiodineblueat660nm.Theimprovedmethodis simple