凝聚胺法交叉配血试验新.docVIP

HSXZ/QMXCXD/ SOP-004（QMXYY/SXK/ SOP-004） 第 PAGE 6 页 共 NUMPAGES 6 页 凝聚胺法交叉配血试验操作规程 [目的] 保证交叉配血试验准确，确保临床输血安全。 [适用范围] XXX医院输血科 [职责] 具有专业技术的工作人员主要负责XXX医院输血标本的交叉配血试验，但只对该单份标本负责。 [相关文件] 试剂采购、保存和使用管理程序 设备采购、使用管理程序 消毒与清洁管理程序 标本采集、运输、保存和报废管理程序 紧急用血管理程序 [相关记录] 仪器设备的采购、使用和维护记录 仪器的温度记录 恒温水温箱的换水和消毒记录 消毒液的配置记录 清洁消毒记录 试剂采购、使用记录 标本交接和报废记录 交叉配血记录 紧急用血记录 [实验原理] 　　红细胞表面带有大量的负电荷，以避免产生自发性聚集，当红细胞悬浮在电解质中时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引，此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕而形成Zeta电位，Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。 凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM）降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞与血清（血浆）中的抗体结合。其次加入的凝聚胺（Polybrene）溶液是一种高价阳离子多聚物、肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞的Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝集。最后加入的悬浮液（Resuspending）具有中和凝聚胺（Polybrene）阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝集而不会散开，试验结果为阳性。 [仪器器械] 　　玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、交叉配血专用离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。 [试剂] 生理盐水、凝聚胺试剂、Anti-human IgG血清，均为有合格证件的正品。 [试剂保存和稳定性] 凝聚胺试剂须保存在2-25℃（其中阴、阳对照血清应储存在2~8℃）。在适当储存条件下有效期24个月。 抗人IgG血清低温冰箱保存。复溶后放2—4℃冰箱保存。 凝聚胺试剂 ①低离子介质溶液（LIM）：含葡萄糖，乙二胺四醋酸-2钠及稳定剂。 ②凝聚胺溶液（Polybrene）：含凝聚胺，氯化钠及稳定剂。 ③复悬液（Resuspending）：含柠檬酸钠，葡萄糖及稳定剂。 ④阳性对照血清：含抗D血清、氯化钠及稳定剂。 ⑤阴性对照血清：含AB血浆、氯化钠及稳定剂，不含红细胞血型抗体。 [标本收集与处理] 1、受检者血清：采集受检者静脉血2~3ml，经1000r/min离心1分钟或室温静置1小时后取上清。 2、2~5%的受检者红细胞：采集受检者静脉血或末梢血，先用生理盐水洗涤红细胞3次，再根据下表进行红细胞悬液的配制。 悬液浓度（%） 压积红细胞（滴） 盐水（滴） 2 1 40(2ml) 5 1 16 (0.8ml) 3、以上标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过12 小时的，必须重新采集标本。 4、标本出现中度以上溶血者，为不合格标本，不能用于检测。 [实验方法与步骤] 1、分别制备受血者和献血者3~5%的红细胞悬液（取2支使管分别标注为受血者管和献血者管，再分别加入2ml生理盐水，在受血者管加入1滴受血者红细胞，在献血者管加入1滴献血者红细胞，混匀后备用）。 2、取4支使管，分别标注主侧、次侧、阴性对照和阳性对照： 主侧管：先加入2滴受血者血清（血浆），再加入1滴献血者2~5%红细胞悬液； 次侧管：先加入2滴献血者血清（血浆），再加入1滴受血者2~5%红细胞悬液； 阴性对照管：先加入2滴阴性对照血清，再加入1滴献血者2~5%红细胞悬液；阳性对照管：先加入2滴阳性对照血清，再加入1滴献血者2~5%红细胞悬液。 3、混匀后各加入LIM溶液0.65ml，轻轻混匀，于室温下静置1分钟。 4、再各加入2滴Polybrene溶液，轻轻混匀，于室温下静置15秒。 5、用交叉配血专用离心机3400 r/min（相当于1000g离心力）离心10秒，然后倒掉上清液（不要沥干），让管底残留约0.1 ml液体。 6、轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。重做后仍然没有凝集现象出现，可能试剂失效。 7、最后各加入2滴Resuspending溶液，轻轻摇动试管并同时目测凝集是否散开，再进一步倒在玻片上用