基于酶热稳定性系统计算的乳酸氧化酶热稳定性改造-生物技术通报.PDF

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2018, 34 8 :144-150 基于酶热稳定性系统计算的乳酸氧化酶热稳定性改造 1 2 2 2 2 2 2 2 1 华晨  李新新  涂涛  杨虹  罗会颖  陈家明  姚斌  柏映国  彭书传 （1. 合肥工业大学资源与环境工程学院，合肥 230009 ；2. 中国农业科学院饲料研究所，北京 100081） 摘 要 ： 乳酸氧化酶能够催化乳酸氧化为丙酮酸，具有重要的工业应用价值，但已有研究表明，不同来源的乳酸氧化酶均 存在热稳定性不好的问题，影响了其在工业当中的应用。 目前对于乳酸氧化酶的研究报道较少，对其热稳定性的改造更未见报道， 因此提高乳酸氧化酶的热稳定性具有重要意义。克隆表达了一个高比活乳酸氧化酶 （EgLOD），通过生物信息学辅助分析及表面电 荷分析软件 （ETSS）对乳酸氧化酶的蛋白结构进行理性分析，基于蛋白表面电荷分布优化设计了9 个突变体尝试对其进行热稳定 性改良。通过对突变体的筛选获得了两个有效提升热稳定性的突变体D250N，D281N，在60℃下处理30 min 仍然能够保持50% 以 上的酶活，而野生型EgLOD 酶活仅剩20% 左右。 关键词 ： 乳酸氧化酶 ；热稳定性 ；分子改造 ；ETSS DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2018-0177 Improving the Thermal Stability of Lactate Oxidase by ETSS 1 2 2 2 2 2 2 HUA Chen LI Xin-xin TU Tao YANG Hong LUO Hui-ying CHEN Jia-ming YAO Bin BAI Ying-guo2 PENG Shu-chuan1 （1. School of Resources and Environmental Engineering ，Hefei University of Technology ，Hefei 230009 ；2. Feed Research Institute ，Chinese Academy of Agricultural Sciences ，Beijing 100081 ） Abstract: Lactate oxidase can catalyze the oxidation of lactic acid to pyruvate，thus it has important industrial application value. However，lactate oxidases from different sources share the common problem of poor thermal stability，which impacts its application in industry. The researches on lactate oxidase are less reported，and there was no report on the improvement of its thermal stability，therefore improving the thermal stability of lactate oxidase is of great s