实验四革兰氏染法.pptVIP

目的要求 学习并掌握革兰氏染色法。 了解革兰氏染色原理。 巩固显微镜的使用方法及无菌操作技术。 菌种 参考菌：金黄色葡萄球菌(G+), 大肠杆菌 (G-) 待测菌：蜡样芽孢杆菌、蓝细菌(微囊藻) 仪器 显微镜 材料 载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、染色缸等 试剂 草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、0.5%番红染色液 主要操作步骤 制片 初染 媒染 脱色 复染 镜检 制片 要用活跃生长期的培养物进行革兰氏染色; 注意练习无菌操作； 在载玻片上滴一小滴生理盐水； 取菌不要贪多，接种环上肉眼可见菌苔痕迹即可； 菌苔在生理盐水中涂片要均匀，局部不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性。 涂片—干燥—固定 初染 将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结晶紫染色液(加量以盖满菌膜为度)，染色1-2min。倾去染色液，用自来水小心地冲洗。 媒染 滴加碘液冲去水迹，再染1-2min，水洗。 脱色 滴加95%乙醇，脱色20-30s立即水洗，以终止脱色。 复染 滴加番红，染色2-3min，水洗。最后用吸水纸轻轻吸干。 干燥后，置显微镜下观察。 被染成蓝紫色者即为革兰氏阳性菌(G?) 被染成红色者是革兰氏阴性菌(G-) 革兰氏阳性和阴性菌细胞壁成分比较 成分 占细胞壁干重的%