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核酸合成 第十二章  核酸和蛋白质的 生物合成 第十二章 核酸的生物合成 预备知识 核酸遗传性大分子；蛋白质功能性大分子； 基因(gene)----生命体遗传信息的传递体，是编码生物活性产物（蛋白质或各种RNA）的DNA功能片段，其功能的体现遵循中心法则。 原核生物：每个细胞只有一个染色体. 真核生物：每个细胞含有多条染色体. 染色体以外的遗传因子：包括细菌的质粒,病毒,真核细胞的细胞器中DNA等。 DNA的体外复制：分子克隆。 底物：dNTP(dATP,dGTP,dCTP,dTTP) 模板：单链的DNA母链 引物：寡核苷酸引物（RNA) 酶和蛋白因子 DNA聚合酶（DNA指导的DNA的聚合酶） 另一种DNA聚合酶（切除引物并补上缺口的酶) 引物酶或RNA聚合酶（引发酶） 解螺旋酶 DNA旋转酶（拓扑异构酶） 单链DNA结合蛋白（原核SSB、真核RPA｝ DNA连接酶（ligase) DNA聚合酶催化反应特点 以4种dNTP为底物 反应需要接受DNA模板的指导，不能催化游离的dNTP的聚合。 反应需有引物 3‘－OH的核酸链(RNA片段) 链生长方向　5’ → 3‘ 产物DNA的性质与模板相同 （二）DNA复制过程 (1)起始阶段　(2)复制的延伸　(3)复制的终止 1 复制的起始 原核生物总是从一个固定的起始点开始，同时向两个方向进行的，称为双向复制。 真核细胞染色体比较复杂，可能有多个复制起始点，同时形成多个复制单位。 复制开始后由于DNA双链解开，在两股单链上进行复制，在电子显微镜下均看到伸展成叉状的复制现象，称为复制叉。 1、DNA复制起始 1、DNA复制起始 DNA复制的酶学 2、DNA复制过程 2、DNA复制过程 2、DNA复制过程 延长: DNA-pol Ⅲ ( DDDP-Ⅲ )的5? → 3?的聚合活性使核苷酸之间生成3?，5?磷酸二酯键 模板 以DNA单链为模板 底物 dNTP（dATP、dGTP、dCTP、dTTP） 引物 以小片段RNA为引物，在 RNA引物的 3? -OH末端上开始逐个添加dNTP 按碱基配对原则 （A = T G ≡ C） 按5? → 3? 方向 2、DNA复制过程 2、DNA复制过程 ? 细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关键点。G1→S及G2→M的调节，与蛋白激酶活性有关。 ? 蛋白激酶通过磷酸化激活或抑制各种复制因子而实施调控作用。 3. 增殖细胞核抗原(PCNA)在复制起始和延长中起关键作用。 DNA复制为什么要用RNA引物？ 从模板复制最初几个核酸时，碱基堆集力和氢键都　较弱，易发生错配。 复制的最初几个核苷酸，没有与模板形成稳定双链，DNA聚合酶的3‘?5校对功能难发挥作用 转录——以DNA为模板，按碱基配对原则把DNA的序列信息抄录给RNA，在RNA聚合酶（依赖DNA的RNA聚合酶）的参与下合成RNA链。 复制——以RNA为模板，按碱基配对原则,在RNA复制酶的参与下合成RNA链。 二、在DNA指导下的RNA合成（转录） 底物：NTP（ATP、GTP、CTP、UTP） RNA链生长方向：5’→3’ 不需引物 需DNA模板 需DNA指导的RNA聚合酶（无3‘－5’外切酶活性） 转录过程： 模板识别（真核生物为装配）； 转录的起始； 转录的延伸； 转录终止 能够转录RNA的那条DNA链称为模板链(template strand) ，也称作反义链。 与模板链互补的另一条DNA链称为编码链(coding strand)，也称为有意义链。 RNA转录合成时，以DNA作为模板，在RNA聚合酶的催化下，连续合成一段RNA链，各条RNA链之间无需再进行连接。 （1）RNA聚合酶（DDRP）依赖DNA的RNA聚合酶（DNA dependent RNA polymerase，DDRP）。该酶在单链DNA模板以及四种核糖核苷酸存在的条件下，不需要引物，即可从5‘→3’聚合形成RNA。 （2）转录因子在真核生物中，凡是与基因表达调控相关的蛋白因子统称为反式作用因子（transacting factor）。在反式作用因子中，直接或间接参与转录起始复合体的形成的蛋白因子被称为转录因子（transcriptional factor, TF） （3）终止因子协助RNA聚合酶识别终止信号的辅助因子（蛋白质）则称为终止因子 (termination factor)。 小 结 转录具有不对称性 转录分为起始、延伸、终止三个阶段。 原核只有一种RNA聚合酶。转录的起始需要RNA聚合酶全酶(?2????)与启动序列结合，由?亚基识别启动序列，进入延伸阶段后， ?亚基脱离，由核心酶催化合成mR